臍帶間充質干細胞的采集及儲存

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臍帶間充質干細胞的采集及儲存

張緒芹

中圖分類號：R714.56

（淄博市婦幼保健院，山東255029）

文章編號：1006－9534（2011）01－0055－02

業(yè)人員逐一編號統(tǒng)一保存。

討

論

文獻標識碼：B

臍帶間充質干細胞是干細胞的一種。因能分化成間質組織而得名，具有亞全能分化潛能，在特定的體內(nèi)外環(huán)境下，能夠誘導分化成為多種組織細胞。從而給人類多種疾病的

［1，3］

。其臨床應用前景非常好。我院自治療提供了原材料

2009年7月始開展此項業(yè)務，積累了一定的經(jīng)驗，先報道如

下。

1．臍帶通常在胎兒、胎盤娩出后被廢棄。而臍帶中含有大量的間充質干細胞，通過保存臍帶，可以變廢為寶方法簡單、易操作，對孕婦和胎兒無不良影響。

［4］

。且

資料與方法

1．一般資料2009年7月～2010年2月，在我院分娩并采集臍帶留取間充質肝細胞的產(chǎn)婦60例，其中，剖宮產(chǎn)者46例，經(jīng)陰分娩者14例。產(chǎn)婦年齡22～38歲，孕周37～42周，新生兒Apgar評分7～10分，體重2500～5600g，所有采集臍帶的產(chǎn)婦和新生兒均無異常。采集的臍帶放置在特制的保存液中，集中保存。2．方法

（1）在產(chǎn)科門診設立臍帶間充質干細胞知識宣傳欄，讓前來做孕期檢查的孕婦極其家屬，了解臍帶間充質干細胞的有關知識和保存臍帶的好處。告知采集臍帶是在

胎兒、

胎盤娩出后采集，不會對產(chǎn)婦和新生兒造成損害。（2）對有意保存臍帶的孕產(chǎn)婦，由臍帶保存機構的專業(yè)人員，向她們及其家屬詳細介紹臍帶的采集方法和保存過程，講解臍帶間充質干細胞的特性及臨床應用，回答他們的問題，解除其疑慮，告知保存臍帶所需要的費用和年限。（3）簽訂協(xié)議。以雙方自愿的原則，與臍帶保存機構簽訂保存協(xié)議，明確雙方的權利和責任。繳納所需的費用。（4）準備用物。產(chǎn)婦入院后，要向值班醫(yī)生和助產(chǎn)士說明要保存臍帶，以便準備采

集用物，

詳細詢問并記錄產(chǎn)婦及其丈夫的家族史、遺傳病史、孕期檢查情況。（5）產(chǎn)婦入院護理。按產(chǎn)婦住院護理常規(guī)。

護士要幫助產(chǎn)婦進行血液、尿液檢查，心電圖檢查、胎心監(jiān)護、彩超、胎兒、胎盤功能檢查等，做好產(chǎn)婦和家屬的心里護理，消除他們的恐懼疑惑心里。（6）留取過程。手術室、產(chǎn)房內(nèi)嚴格消毒，所用物品均為一次性無菌材料。胎兒娩出后，常規(guī)結扎處理好臍帶，胎盤娩出后，先結扎臍帶的斷端，在距斷端20～40cm處用0．5%碘伏棉球消毒后剪斷，輕輕擠凈臍血管內(nèi)的血液，注意一定要把血液擠干凈，再用無菌絲線結

扎，

然后將用生理鹽水把臍帶沖洗干凈，最后把臍帶放入盛有特制保存液的容器中密封．。在容器外貼上標簽，注明產(chǎn)

婦姓名、

留取單位、住院號、新生兒出生時間、性別、體重。另采集產(chǎn)婦靜脈血5ml于試管內(nèi)。詳細填寫產(chǎn)婦和新生兒的

有關信息和分娩情況表格。讓產(chǎn)婦和家屬確認并簽字。將臍帶、試管和信息表格，一起放入4℃的冰箱中。（7）通知臍帶保存機構的專業(yè)技術人員來取。時間不能超過48h。

結

果

此60例產(chǎn)婦均系自愿保留臍帶提取間充質干細胞，并

積極配合。所留取的臍帶均符合保存條件，被臍帶保存庫專

2．保留臍帶間充質干細胞的適應癥

（1）產(chǎn)婦要求：年

齡在38歲以下，

發(fā)育、營養(yǎng)正常，無惡性腫瘤及傳染病，無家族遺傳病史，無血液病、代謝性疾病，羊水檢查未發(fā)現(xiàn)染色體

異常。（2）胎兒要求：活胎、無畸形。3．間充質干細胞的特性

（1）具有強大的增殖能力和多

向分化潛能，

在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下，不僅可分化為造血細胞，還具有分化為肌細胞、肝細胞、成骨細胞、軟骨細胞、

基質細胞等多種細胞的能力。（2）具有免疫調(diào)節(jié)功能，通過細胞間的相互作用及產(chǎn)生細胞因子抑制T細胞的增值及其

免疫反應，

從而發(fā)揮免疫重建的功能。（3）具有來源方便，易于分離、培養(yǎng)、擴增和純化，多次傳代擴增后仍具有干細胞特性，

不存在免疫排斥的特性。4．間充質干細胞臨床應用的常見問題

（1）免疫排斥反應，同種異體干細胞移植最大的限制就是免疫排斥反應，引起細胞間移植排斥的是一類稱作主要組織相容性抗原的蛋白質分子。間充質干細胞最大的特性就是幾乎不表達HLA－II類分子，這就意味著不同個體間應用間充質干細胞不會引起排斥反應，為間充質干細胞的廣泛應用奠定了基礎。（2）致瘤性，已有研究表明，人間充質干細胞在體外培養(yǎng)擴增25代以上仍可保持基因穩(wěn)定，不會形成惡性克隆，同時動物體內(nèi)實驗也未見腫瘤形成，這就為間充質干細胞的臨床應用提供了有力的保障。（3）質控體系為保證臨床用間充

質干細胞的質量，

在分離、培養(yǎng)、傳代、凍存及檢測的每一個過程均設置了多重質控，且均在GMP實驗室內(nèi)完成，制備的

間充質干細胞在所有檢測完成并合格后投入臨床應用。5．臍帶間充質干細胞的優(yōu)點

（1）臍帶中的間充質干細

胞更原始，有更強的增值分化能力。（2）免疫細胞較為幼稚，功能活性低，不會觸發(fā)免疫反應及引起移植物抗宿主病。（3）干細胞易于分離，純度高，無腫瘤細胞污染。（4）擴增時培養(yǎng)體系統(tǒng)一，便于第一文庫網(wǎng)質控。（5）可制成種子細胞低溫凍存，多次使用，復蘇后細胞損失小。（6）潛伏性病毒和病原微生物的感染及傳播幾率比較低。（7）采集時對產(chǎn)婦和新生兒無任何危害及損傷。（8）采集方便，來源廣泛，易于保存和運輸，不受任何倫理和法理的控制，具有廣闊的臨床應用前景

［5，6］

。

參

考

文

獻

1］黃鵬，馬廉．人臍帶間充質干細胞的應用和研究現(xiàn)狀和進展［J］

．中國輸血雜志，

2009，03．（下轉第49頁）

［

變即胎盤的過度增生，肥大，出現(xiàn)大胎盤。

根據(jù)本研究對GDM胎盤VEGF免疫組織化學染色光鏡觀察，發(fā)現(xiàn)VEGF在GDM血糖控制欠佳組胎盤中表達陽性率明顯高于對照組（84．6%vs30．6%，P＜0.01）。缺氧缺血是引起VEGF高表達的重要介導因子，在糖尿病患者的許

糖基化終末產(chǎn)物、缺氧缺血等因素使一些多組織因高血糖、

［5，6］

。因此，VEGF的高表促血管生長的細胞因子表達增加

達可能與干絨毛小動脈管壁增粗、管腔狹窄有關。另外，糖

GDM胎盤中高表達與缺氧缺血、高血糖相關，故推測：GDM孕婦血糖控制欠佳時，胎盤存在缺氧狀況，所分娩的新生兒，

神經(jīng)行為評分欠理想，陳舊性顱內(nèi)出血的發(fā)生率升高。Bjork等

對胎盤進行的研究表明，妊娠12～32周血糖變化與胎盤形態(tài)結構變化密切相關，而妊娠32周后，血糖變化與胎盤

［12］

形態(tài)結構變化無關，進一步表明妊娠早期血糖控制有重要臨床意義。本研究只是僅僅做了新生兒的追蹤，存在局限性，對于嬰兒遠期神經(jīng)行為的影響有待進一步研究�？傊�，對GDM研究的目的是使GDM孕婦得到早預防、早診斷、早治療，期望盡量減少對子代的影響。

參

考

文

獻

尿病的高血糖狀態(tài)能使有絲分裂原蛋白激酶（MAPK）成員

p42/p44以及蛋白激酶C（PKC）先后或同時活化，能介導

［7］

VEGF的升高。糖化血紅蛋白（HbA1c）是葡萄糖與血紅蛋血糖控制差的GDM患者HbA1c升白的β鏈N端結合產(chǎn)物，

高，而高HbA1c可使紅細胞氧離曲線左移，引起細胞氧離能使血管向組織供氧減少，加之血糖升高致使血液粘力下降，稠度增加，微血管灌注不良，引起組織細胞缺氧缺血，損傷內(nèi)

［8，9］

。因此推測，VEGF在GDM使其合成VEGF增加皮細胞，

胎盤中高表達與缺氧缺血、高血糖相關。本研究對GDM胎

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收稿日期：2010－04－29

盤VEGF免疫組織化學染色光鏡觀察，還發(fā)現(xiàn)VEGF在GDM血糖控制較好組胎盤中表達陽性率與對照組比較無統(tǒng)計學意義；VEGF在GDM血糖控制欠佳組胎盤中表達陽性率高于血糖控制較好組。這提示我們應嚴格控制孕婦血糖達理想

盡量避免胎盤結構和功能的改變，以求避免給胎兒生狀態(tài)，

長發(fā)育異常和新生兒出生后患病率的增高埋下伏筆。本研究通過對研究對象新生兒的追蹤，發(fā)現(xiàn)GDM組孕婦所分娩的新生兒頭顱B超最常見的異常表現(xiàn)為：室管膜下脈絡叢囊性改變。脈絡叢見于第Ⅲ、Ⅳ腦室頂和囊性改變、

部分側腦室壁。它是由富含血管的軟膜與室管膜直接相貼并突入腦室而成的皺襞狀結構，脈絡叢的主要功能是產(chǎn)生腦脊液，腦脊液是由脈絡叢上皮細胞分泌的，室管膜則成為有脈絡分泌功能的脈絡叢上皮。新生兒的室管膜下囊性改變、叢囊性改變，是形成于：宮內(nèi)缺氧/感染引起的陳舊性出血或囊性改變是滲血或液經(jīng)過兩三個月形成血管發(fā)育異常，［10］［11］

（neonatalbehavioralneuro-的。新生兒行為神經(jīng)測定

NBNA）可以了解新生兒行為能力，logicalassessment，并能早

期發(fā)現(xiàn)輕微腦損傷，以便早期干預。我國新生兒神經(jīng)行為評適用于足月新生兒/早產(chǎn)兒孕周糾正至40周時，分共20項，

37評分總分為40分，以一周內(nèi)新生兒獲37分以上為正常，分以下尤在2周內(nèi)≤37分者需長期隨訪。本研究發(fā)現(xiàn)

VEGF在胎盤呈高陽性表達率所分娩的新生兒行神經(jīng)行為評分低于VEGF呈低表達率所分娩的新生兒；VEGF在胎盤呈高陽性表達率所分娩的新生兒頭顱超聲發(fā)現(xiàn)室管膜下囊性

脈絡叢囊性改變等異常的機率升高。因為VEGF在改變、

（上接第55頁）［2］鄭志娟，莊文欣，付文玉．人臍帶間充質干細胞的研究進J］．解剖科學進展，2008，01．展［［3］孫國棟，李志中．人臍帶間充質干細胞在組織工程中的研J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2009，12．究進展［［4］薛美思，劉毅．臍帶間充質干細胞在細胞治療中的研究進

J］．中國美容醫(yī)學，2008，09．展［

櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀

［5］侯克東，盧世壁，張莉，等．人臍帶Wharton膠中間充質干

．解放軍醫(yī)學雜志，2008，33細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定［J］

（4）：375－378．