「冬蟲(chóng)夏草」的養(yǎng)殖

冬蟲(chóng)夏草，又稱(chēng)為夏草冬蟲(chóng)，簡(jiǎn)稱(chēng)蟲(chóng)草。全世界目前已報(bào)道發(fā)現(xiàn)由蟲(chóng)草屬真菌Cordyceps寄生于昆蟲(chóng)、蜘蛛和其他生物長(zhǎng)出子實(shí)體的蟲(chóng)草種類(lèi)達(dá)400多種；我國(guó)已記錄68種。在國(guó)內(nèi)外一些人和學(xué)者的概念中，把凡是由蟲(chóng)草屬真菌寄生并能產(chǎn)生子實(shí)體的菌物結(jié)合體都通稱(chēng)為冬蟲(chóng)夏草。然而，中國(guó)傳統(tǒng)的中醫(yī)藥學(xué)和我國(guó)絕大部分學(xué)者和人們及本文所指的冬蟲(chóng)夏草，是特指僅分布于我國(guó)青藏高原及邊緣地區(qū)高寒草甸中的中華蟲(chóng)草菌Cordyceps sienesis (Berkeley) Saccardo (1878)寄生于昆蟲(chóng)綱、鱗翅目、蝙蝠蛾科、蝠蛾屬Hepialus幼蟲(chóng)感病后形成的蟲(chóng)、菌結(jié)合體;；而其他類(lèi)群僅稱(chēng)為蟲(chóng)草，不是正宗的冬蟲(chóng)夏草。

一、冬蟲(chóng)夏草和寄主昆蟲(chóng)的藥用歷史及發(fā)展現(xiàn)狀

藥用冬蟲(chóng)夏草，最早的文字見(jiàn)于清朝汪昂的《本草備要》(1694)所載："冬蟲(chóng)夏草，甘平，保肺益腎，止血化痰，止勞咳。四川嘉定府所產(chǎn)者佳。冬在土中，形如老蠶，有毛能動(dòng)，至夏則毛出土上，連身俱化為草。若不取，至冬復(fù)化為蟲(chóng)。后來(lái)，趙學(xué)敏的 《本草綱目拾遺》(1756)一書(shū)中記載："夏草冬蟲(chóng)，功與人參同，能治諸虛百損"，該書(shū)還對(duì)冬蟲(chóng)夏草的產(chǎn)地、食用方法和用量有詳細(xì)的記述。1757年吳儀洛所著的 《本草從新》一書(shū)也指出：“冬蟲(chóng)夏草保肺益腎、止血化痰�！逼浜� 《黔囊》、《文房肆考》、《四川通志》、《本草圖說(shuō)》等數(shù)百部古藥書(shū)中都記載了冬蟲(chóng)夏草。

我國(guó)把冬蟲(chóng)夏草作為藥材出口到國(guó)外的歷史比文字記載的更悠久。從明代中葉1400一1465年間就從浙江傳到日本，并在貴族中廣泛食用。1723年由歐洲的傳教士尚加特利茨庫(kù)把從中國(guó)西北采到的冬蟲(chóng)夏草帶到法國(guó)，由Reaumur在法國(guó)科學(xué)院的學(xué)士大會(huì)作了介紹，并登在會(huì)議紀(jì)要上；1943年，Berkeley鑒定了中國(guó)的冬蟲(chóng)夏草，正式定名為：中國(guó)蟲(chóng)草Sphaeri sienesis；1878年由Saccardo歸為蟲(chóng)草屬Cordyceps，冬蟲(chóng)夏草的研究在國(guó)外引起重視，中國(guó)蟲(chóng)草也開(kāi)始馳名于世。

冬蟲(chóng)夏草由于僅分布于中國(guó)，又是數(shù)百年來(lái)我國(guó)和亞洲人民視為與天然人參、鹿茸相媲美的名貴滋補(bǔ)中藥材，享有極高的聲譽(yù)。它藥性作用溫和，比其他種類(lèi)的滋補(bǔ)品更具有廣泛的藥用和食用性，長(zhǎng)期以來(lái)是我國(guó)既可藥用又可食用的高級(jí)滋補(bǔ)品，并且一年四季都可食用，對(duì)老、少、病、弱、虛者皆宜服用，無(wú)任何副作用。古代70多部中藥學(xué)文獻(xiàn)把冬蟲(chóng)夏草的功用歸納為:"能陰陽(yáng)并補(bǔ)，治勞嗽膈癥，諸虛百損；功與人參、鹿茸同，但藥性溫和，老少病虛者皆宜食用??。"新中國(guó)建立以來(lái)，我國(guó)有200多部藥書(shū)詳細(xì)記載了冬蟲(chóng)夏草的藥效與用途，歷部 《中華人民共和國(guó)藥典》記載其功用為："補(bǔ)肺益腎，止血化痰。用于久咳虛喘，勞嗽咯血，陽(yáng)痿遺精，腰膝酸痛。"隨著國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)的發(fā)展和中藥學(xué)在全世界逐步普及，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草的功用效果越來(lái)越廣泛。經(jīng)研究證明，它是具有鎮(zhèn)靜，止血，抗驚厥，降壓，改善心肌缺血，抗血小板凝結(jié)，抗衰老，調(diào)節(jié)人體免疫和具有抗肺癌、淋巴癌和肝癌功能的藥物。目前越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外藥學(xué)界和生物學(xué)界研究者的重視，有關(guān)研究報(bào)道大量增加。 最早科學(xué)地描述和發(fā)表我國(guó)青藏高原有蝠蛾屬昆蟲(chóng)分布是英國(guó)的Poujade1886年在四川省的寶興縣雪山上發(fā)現(xiàn)一種蝠蛾，被他定名為德氏蝠蛾Hepialus davidi；后來(lái)Alphe raky、Staudinger等學(xué)者分別于1889和1895年在西藏發(fā)現(xiàn)了暗色蝠蛾H.nebulosus（同種異名：泥色蝠蛾H.luteus)、異色蝠蛾H.varians兩個(gè)種類(lèi)。1909年Oberthur在法國(guó)的Armorica半島上整理由中國(guó)西藏、四川帶去的藥材和植物標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)一頭蝠蛾成蟲(chóng)，并以該半島名稱(chēng)定名為H.armoricanus，但在發(fā)表新種時(shí)說(shuō)明，該種蝠蛾產(chǎn)地可能是中國(guó)川藏高原，因在半島一直未再發(fā)現(xiàn)有該種蝠蛾分布；后來(lái)一直到1959年中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所科研人員在四川康定等地采到大量的蝠蛾成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)，經(jīng)朱弘復(fù)鑒定，與在法國(guó)Armorica半島發(fā)現(xiàn)的蝠蛾是同一種，從而定名為蟲(chóng)草蝙蝠蛾，并確定為中國(guó)特產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草菌的寄主昆蟲(chóng)之一。到目前為止，在青藏高原及邊緣地區(qū)已發(fā)現(xiàn)中國(guó)特有的冬蟲(chóng)夏草菌寄主昆蟲(chóng)37種。

二、冬蟲(chóng)夏草與蝠蛾昆蟲(chóng)人工培育和產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀

（一）有性型冬蟲(chóng)夏草人工培育現(xiàn)狀

冬蟲(chóng)夏草人工培育在近20年來(lái)全國(guó)先后有60多個(gè)科研單位和數(shù)千人進(jìn)行了大量的研究、實(shí)驗(yàn)和探索；云南、四川等地已在高海拔地區(qū)取得了小面積培育有性型成功的經(jīng)驗(yàn)，但由于周期長(zhǎng)，高海拔地區(qū)無(wú)推廣對(duì)象、投資大、效益不如自然采集的高等多種因素，一直未能大面積推廣。在云南、四川、浙江、甘肅、青海、北京、福建、廣東、貴州、廣西等省(市、區(qū))中低海拔地區(qū)，開(kāi)展人工培育有性型冬蟲(chóng)夏草研究也有多年，雖然在某一些環(huán)節(jié)上已有多家取得了十分可喜的成績(jī)或成果，如云南和四川等省已在昆明、成都和重慶的室內(nèi)人工批量、重復(fù)繁殖成功蝠蛾昆蟲(chóng)；浙江等地在室內(nèi)零星繁殖成功蝠蛾昆蟲(chóng);但由于沒(méi)有解決蟲(chóng)與菌接種和批量、重復(fù)長(zhǎng)出子座體的難關(guān)，不能稱(chēng)為培育成功。離小面積、小批量、多次重復(fù)在低海拔人工培育出有性型冬蟲(chóng)夏草的目標(biāo)都還十分遙遠(yuǎn)；雖然數(shù)家已聲稱(chēng)在中、低海拔批量培育成功有性型冬蟲(chóng)夏草，事實(shí)上科學(xué)的可信度極低。因?yàn)椋?/p>

(1)目前還無(wú)一家能長(zhǎng)期又穩(wěn)定地分離培養(yǎng)到正宗的冬蟲(chóng)夏草真菌 (即反復(fù)在培養(yǎng)基上批量長(zhǎng)出子座)。青誨、云南、四川、北京等地在培養(yǎng)基上都培養(yǎng)出過(guò)子座，但其子囊孢子稀少或無(wú)子囊孢子，而且生長(zhǎng)都不穩(wěn)定，不能說(shuō)明已掌握了有性型人工在中低海拔的培育技術(shù)。

(2)冬蟲(chóng)夏草菌無(wú)性型人工培養(yǎng)技術(shù)比較容易掌握，在室內(nèi)接種到蝠蛾幼蟲(chóng)上也能感染成為僵蟲(chóng)期，但確罕見(jiàn)有完成有性型，長(zhǎng)出子座體和子囊孢子。

(3)目前子座的形成除了海拔、氣候、土壤、氣壓等多種環(huán)境因素外，其菌之間是否多菌復(fù)合感染?如果是復(fù)合感染，又是哪一些菌在起關(guān)鍵作用?在什么時(shí)期與冬蟲(chóng)夏草菌起作用?等等問(wèn)題尚不清楚。

因此，要在中低海拔地區(qū)人工批量和重復(fù)培育出有性型的冬蟲(chóng)夏草，還需做大量的研究和實(shí)驗(yàn)工作。就是在高海拔地區(qū)進(jìn)行大面積人工培育冬蟲(chóng)夏草，也還需開(kāi)展許多技術(shù)性的實(shí)驗(yàn)工作。所以有性型冬蟲(chóng)夏草人工培育要達(dá)到規(guī)�；�或產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，研究還十分艱巨，路程還非常遙遠(yuǎn)。

(二)無(wú)性型冬蟲(chóng)夏草人工培養(yǎng)現(xiàn)狀

由于有性型冬蟲(chóng)夏草的人工培育困難太大，近10多年來(lái)，大部分開(kāi)展冬蟲(chóng)夏草人工培育研究的單位和研究人員都紛紛轉(zhuǎn)向無(wú)性型的研究與應(yīng)用上。由于蟲(chóng)草菌無(wú)性型培養(yǎng)技術(shù)容易掌握，而且從自然界采集冬蟲(chóng)夏草分離出來(lái)的真菌，絕大部分理化性質(zhì)和藥理功能與冬蟲(chóng)夏草的有性成分相似，所以各地都把自我分離出的真菌確定為冬蟲(chóng)夏草菌的無(wú)性階段，并紛紛建廠生產(chǎn)菌粉和開(kāi)發(fā)應(yīng)用。目前已從自然界的冬蟲(chóng)夏草體中分離出自我認(rèn)為是中華蟲(chóng)草菌無(wú)性型共有9屬31種，其中有16種已經(jīng)在北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、廣東、云南、貴州等19個(gè)省 (市)40多家，進(jìn)行深層大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)和固體培養(yǎng)菌絲體和分生孢子體作為有性型冬蟲(chóng)夏草的代用品，部分廠家已進(jìn)入大的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，如至靈膠囊、金水寶膠囊、寧心寶膠囊、心肝寶、冬蟲(chóng)夏草雞精、蟲(chóng)草膠囊、冬蟲(chóng)夏草酒、冬蟲(chóng)夏草人參補(bǔ)酒等20多種產(chǎn)品年產(chǎn)值均達(dá)千萬(wàn)元至數(shù)億元。而且，由于用菌絲體和分生袍子人工繁殖周期短、產(chǎn)量高，今后作為冬蟲(chóng)夏草有性型的代用品，開(kāi)發(fā)、應(yīng)用的潛力還極大。

三、冬蟲(chóng)夏草和蝠蛾昆蟲(chóng)人工培育技術(shù)

(一)冬蟲(chóng)夏草茵的寄主昆蟲(chóng)飼養(yǎng)繁殖技術(shù)要進(jìn)行冬蟲(chóng)夏草的人工培育，首先必須大量人工飼養(yǎng)寄主一一蝠蛾屬昆蟲(chóng)。蝠蛾一生中有98%的時(shí)間都在土壤內(nèi)生活，僅有2.5一13d的成蟲(chóng)期營(yíng)地面生活。所以，這類(lèi)昆蟲(chóng)的人工飼養(yǎng)管理主要是在土壤中開(kāi)展。

1.蝠蛾的飼養(yǎng)工具

(1)蝠蛾卵的飼養(yǎng)工具。飼養(yǎng)蝠蛾卵可用兩種方法，一是用直徑15一20cm的玻璃培 養(yǎng)皿，墊上2一3層濾紙，皿內(nèi)放一塊吸水棉保持濕度，每皿可飼養(yǎng)200一500粒卵。此法利于觀察，但難掌握濕度。二是用l0cm xX5一8cm的廣口瓶或者25cm x 30cm的玻璃飼養(yǎng) 缸，內(nèi)置3一5cm厚的過(guò)篩細(xì)腐殖土，種上1一2棵珠芽寥植物，把卵放養(yǎng)于土表至lcm深的土層中，每瓶可飼養(yǎng)300一1000粒卵；飼養(yǎng)時(shí)只要掌握住植物不枯萎，即可不加濕度。此法卵的孵化率高，但觀察和移植幼蟲(chóng)對(duì)比較困難。

(2)幼蟲(chóng)的飼養(yǎng)工具有以下4種。

a.玻璃養(yǎng)蟲(chóng)缸：用18一25cmX30一35cm的玻璃缸，也可用標(biāo)本浸泡缸，放置土壤15一25cm，種上幼蟲(chóng)取食的植物，把剛孵化幼蟲(chóng)移入缸內(nèi)，每缸可飼養(yǎng)10一30頭幼蟲(chóng)。 b.地下養(yǎng)蟲(chóng)箱：箱一般高30一50cm，寬20一25cm，厚3一5cm。飼養(yǎng)箱骨架用鋼筋 焊成，上面鋼筋做成提手，便于提動(dòng)；寬的兩面用3一5mm玻璃，便于觀察蟲(chóng)體活動(dòng)；底 和兩個(gè)側(cè)面裝上16孔目的銅紗網(wǎng)，便于水分滲入。然后裝上土壤，種植飼料植物，每箱放養(yǎng)20一50頭幼蟲(chóng)；在較堅(jiān)實(shí)的地上挖一個(gè)比飼養(yǎng)箱體積稍大和深的槽，把養(yǎng)蟲(chóng)箱放入槽中，觀察時(shí)將養(yǎng)蟲(chóng)箱提出地面，抹去外表玻璃上的土壤，即可清楚看到幼蟲(chóng)活動(dòng)情況。

c.大型養(yǎng)蟲(chóng)籠：在半自然的狀況下，選擇一塊排水好、土質(zhì)疏松的場(chǎng)地，挖長(zhǎng)12一l5m、寬2一3m、深4Ocm的深槽，底部和四周墊上尼龍紗網(wǎng)(最好用雙層，小蟲(chóng)不易鉆出)，再把疏松的腐殖土鏟進(jìn)填平，種上幼蟲(chóng)食物，放入幼蟲(chóng)飼養(yǎng)，每平方米可放養(yǎng)30一50頭；該法有利于大規(guī)模飼養(yǎng)，但觀察困難。

d.用各類(lèi)盆具裸露飼養(yǎng)：把植物飼料洗凈放入盆中，放入幼蟲(chóng)飼養(yǎng)，盆口覆蓋一層黑布或者黑紙遮光。此法利于生活史觀察，但要注意勤換飼料和清除糞便。

(3)蛹和成蟲(chóng)的飼養(yǎng)工具。制作長(zhǎng)50cm、寬50cm、高55一60cm的養(yǎng)蟲(chóng)箱。底部用薄鐵板或雙層銅紗網(wǎng)封底；頂和四周用鐵紗或尼龍紗封蓋，前面可制成一道活動(dòng)紗網(wǎng)門(mén)。在箱底放入10一20cm的土壤，種上植物，把蛹和成蟲(chóng)放養(yǎng)土中，此法可進(jìn)行密植飼養(yǎng)。

2.飼養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)

(1)土壤的選擇。土壤是蝠蛾昆蟲(chóng)一生中最主要的活動(dòng)場(chǎng)所。土壤條件是否適合該蟲(chóng)生活是人工飼養(yǎng)成活率高低的關(guān)鍵之一。最適宜蝠蛾生長(zhǎng)的是高山草甸土；次之是流石灘和草甸混合土；再次之是高山棕色、暗棕色林土，其他土壤對(duì)此蟲(chóng)生長(zhǎng)不良。

(2)食料的選擇。幼蟲(chóng)最喜取食圓穗蓼、珠芽蓼、黃芪、小大黃等植物的嫩根芽。由于蝠蛾昆蟲(chóng)是一類(lèi)雜食性昆蟲(chóng)，在無(wú)上述植物的地方，可用禾本科 (如青稞、麥、谷芽等)；十字花科、莎草科的嫩根飼養(yǎng)。在中、低海拔地區(qū)(適宜生活的溫度下)用土大黃、胡蘿卜、白蘿卜、白薯 (紅苕)、馬鈴薯、蘋(píng)果等飼喂也能正常生長(zhǎng)發(fā)育，最好為土大黃、胡蘿卜和白薯三類(lèi)。

(3)溫、濕度的選擇。蝠蛾昆蟲(chóng)是一類(lèi)耐低溫而怕高溫的昆蟲(chóng)。最適宜在15一19C中生活成長(zhǎng)；此蟲(chóng)最適宜空氣濕度75%一85%，土壤含水量40%一45%之間。

3.管理技術(shù)

(1)成蟲(chóng)期。成蟲(chóng)不取食任何食物，只要保持水分和適宜溫度即能正常成活和產(chǎn)卵。但蛾子棲息環(huán)境與產(chǎn)卵量有關(guān)。成蟲(chóng)最喜選擇有杜鵑和蝠蛾幼蟲(chóng)取食的蓼科等植物根旁產(chǎn)卵，所以在蛾子交配產(chǎn)卵前植上幾株相關(guān)植物最佳；另外不能有強(qiáng)光影響。

(2)卵期。要使卵能正常孵化，一定要掌握好適宜的溫、濕度。

(3)幼蟲(chóng)期。幼蟲(chóng)由于生長(zhǎng)期長(zhǎng)，而且蟲(chóng)體壁薄而易破，飼養(yǎng)時(shí)一定要細(xì)心，除了必要的觀察、換土和換食料外，盡量減少翻動(dòng)。幼蟲(chóng)的飼養(yǎng)關(guān)鍵是初孵的幼齡時(shí)期，初孵幼齡蟲(chóng)要給足細(xì)小鮮嫩、濕度不高的食物；土壤最好經(jīng)過(guò)篩檢，以免粗硬物擦傷主體。此外，為了延長(zhǎng)食料和土壤不霉壞，更換前用紫外燈照射殺菌l5min，土壤也可在陽(yáng)光下暴曬1一2h后再用。

(4)蛹期。養(yǎng)蛹時(shí)，把養(yǎng)蛹器皿內(nèi)的土壤壓實(shí)，然后用與蛹粗細(xì)的木棍人工造一土室，土室略斜，深約2一3cm，每室放一蛹，放蛹時(shí)，蛹頭向土表面，上用細(xì)土蓋住。蛹的溫濕度，可控制在大氣濕度80%一85%，土壤含水量42一45%之間，溫度18一22℃之間。

[二]冬蟲(chóng)夏草菌的人工培養(yǎng)技術(shù)

要獲得純正的冬早夏草菌種必須進(jìn)行人工的分離、純化、復(fù)壯、保存等工作。

1.分離冬蟲(chóng)夏草菌的技術(shù)與條件

(1)材料要求。獲得純的菌種對(duì)材料要求比較嚴(yán)格；一般來(lái)說(shuō)如果是進(jìn)行冬蟲(chóng)夏草的組織塊分離法，最佳的分離材料是每年的10月底至11月份，青藏高原高寒草甸土壤剛開(kāi)始凍結(jié)時(shí)期采的材料，這個(gè)時(shí)期冬蟲(chóng)夏草菌剛感染蝠蛾幼蟲(chóng)進(jìn)入僵蟲(chóng)期不長(zhǎng)時(shí)間，嫩小的子座芽剛長(zhǎng)出蟲(chóng)頭部0.2一0.5cm，蟲(chóng)體內(nèi)其他雜菌較少，最易進(jìn)行分離。如果是第二年5一6月份采的材料，僵蟲(chóng)體和子座上都有許多種雜菌共生或腐生，難獲得純菌種。若用子囊孢子進(jìn)行分離培養(yǎng)，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子剛有部分成熟期采集分離培養(yǎng)。

(2)操作方法。有以下3步。

a.僵蟲(chóng)體 (即菌核)的分離：分離前，用水刷洗干凈主體表面，再用無(wú)菌水清洗2一3次；用0.1%一0.2%的升汞溶液，對(duì)分離材料進(jìn)行約3一5min的表面消毒；再用無(wú)菌水清洗。選取與胸足為界的前段部分。用解剖刀切去表皮，避開(kāi)消化道，取血腔菌絲切成芝麻粒大小，壓入平板培養(yǎng)基中，每皿1一2粒。置于15一19℃中培養(yǎng)，待菌落長(zhǎng)出0.2一0.5cm時(shí)，挑選少量菌絲反復(fù)在平板培養(yǎng)基上分純2一4次，確定無(wú)其他雜菌后，移入試管保存和培養(yǎng)。 b.子座芽分離：從僵蟲(chóng)頭頂切下洗凈的子座芽，置入0.1%升汞液中消毒2一3min，用無(wú)菌水洗凈，切取中間部位組織塊壓入培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件同a。

c.子囊孢子分離：用透明紙袋套住子囊孢子成熟的子座，讓子囊孢子彈跳粘貼在紙袋上，然后，把有子囊孢子的紙袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15一19℃中培養(yǎng)，每天鏡檢，當(dāng)袍子萌發(fā)時(shí)，用微吸管吸單個(gè)孢子滴于平板中培養(yǎng)；培養(yǎng)條件同a。

也可把整個(gè)成熟的冬蟲(chóng)夏草帶回室內(nèi)，用棉紙把僵蟲(chóng)和連蟲(chóng)體的子座包住，僅留出有孕部分，在無(wú)菌室中，橫放，下置一片載玻片，隨時(shí)保持主體濕度；每天鏡檢，當(dāng)看到子囊孢子彈到玻片時(shí)，用微吸管吸到平皿的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)條件同a。

(3)培養(yǎng)基的選用。

a.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (PDA)，此種配方是所有蟲(chóng)草菌屬真菌的通用培養(yǎng)基，在分離培養(yǎng)初期可用該配方，不過(guò)菌種生長(zhǎng)不十分旺盛，而且易老化、退化。

b.加富培養(yǎng)基 (1)：多性蛋白臍10g，葡萄糖50g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，活蠶蛹30g，生長(zhǎng)素0.5μg，瓊脂20g，加水1000mL，pH：5.0。

加富培養(yǎng)基 (Ⅱ)：蛋白脯40g，葡萄糖40g，去皮鮮馬鈴薯100g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏10g，生長(zhǎng)素0.5μg，蝠蛾活幼蟲(chóng) (磨碎)30g，瓊脂20g，高寒草甸土浸出液10OOmL，pH：5.0。

在加富培養(yǎng)基上，菌落比在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)旺盛和迅速；加富Ⅱ號(hào)又優(yōu)于Ⅰ號(hào)。

2.生長(zhǎng)特性 冬蟲(chóng)夏草菌的分離培養(yǎng)中須掌握溫度、pH值、光照、碳和氮源及無(wú)機(jī)鹽的利用狀況。

(1)不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。冬蟲(chóng)夏草菌喜偏低溫度。在0一4℃時(shí)能緩慢生長(zhǎng)；5一8℃時(shí)生長(zhǎng)速度加快；10一19℃是此菌較適生長(zhǎng)發(fā)育的范圍;最佳生長(zhǎng)溫度為15一l9℃。超過(guò)20℃菌絲猛長(zhǎng)，菌落由白色變?yōu)榛液诨蜃攸S色，開(kāi)始出現(xiàn)變異，所以不宜高溫培養(yǎng)。

(2)對(duì)pH值的要求。冬蟲(chóng)夏草菌是一種偏酸性真菌，最適pH值為5.0一6.0，當(dāng)pH值為4.5以下和6以上時(shí)，隨著增高或降低，生長(zhǎng)緩慢至不生長(zhǎng)。

(3)光照的影響。此菌的子囊孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)初期，適應(yīng)于弱光和短光照，后期則適應(yīng)于較強(qiáng)光照。在人工培養(yǎng)中，菌絲、分生孢子和子座等具有明顯的趨光性，向陽(yáng)面生長(zhǎng)多而

密，背光面生長(zhǎng)稀疏，全黑環(huán)境下培養(yǎng)的各種菌態(tài)纖弱、細(xì)長(zhǎng)、稀疏。

(4)對(duì)碳源的利用。冬蟲(chóng)夏草菌可利用多種碳源，但以葡萄糖和麥芽糖合用時(shí)生長(zhǎng)最快，單用葡萄糖時(shí)也能良好地生長(zhǎng)，次之是馬鈴薯等淀粉，再次之是蔗糖。

冬蟲(chóng)夏草菌是一種由寄生活體寄主，再由腐生階段發(fā)育成熟的真菌，所以對(duì)氮源中的多種有機(jī)氮均能較好的利用。而以活蟲(chóng)體最佳；蛋白胨與酵母膏合用生長(zhǎng)也十分理想，次之是二者單獨(dú)使用，再次之是牛肉膏等。而對(duì)無(wú)機(jī)氮如硫酸銨、硝酸鉀等利用較差。

對(duì)灰分養(yǎng)料有一定的需求，在有微量的硫酸鎂、磷酸氫二鉀的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛，次之是磷酸二氫鉀，其他鈉、鈣、鐵、銅等無(wú)機(jī)鹽也可利用。

3.培養(yǎng)方式 冬蟲(chóng)夏草菌分離純化后，即可作為各種實(shí)驗(yàn)和擴(kuò)大生產(chǎn)應(yīng)用。

(1)其擴(kuò)大生產(chǎn)的方法常有三種：固體靜置培養(yǎng)法、振蕩培養(yǎng)法和大罐通氣發(fā)酵培養(yǎng)法。 a.靜置培養(yǎng)：主要用在固體培養(yǎng)，如試管斜面、三角瓶培養(yǎng)、米飯培養(yǎng)等等。在靜置培養(yǎng)中只要掌握好溫度和光照即可使菌正常生長(zhǎng)。當(dāng)斜面上的分生孢子成熟后，即可存入1一2℃的冰箱中保存8一14個(gè)月，也可作為種子直接用于生產(chǎn)。

b.振蕩培養(yǎng)：采用液體培養(yǎng)菌種或小規(guī)模繁殖培養(yǎng)，都可用振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)的培養(yǎng)基，把固體培養(yǎng)基減去瓊脂即可。設(shè)備最好選用恒溫振蕩培養(yǎng)機(jī)，用三角瓶置液體培養(yǎng)基，把試管固體菌種接入即可培養(yǎng)。經(jīng)不斷振蕩使液體培養(yǎng)基中各種成分混合均勻而不致沉淀，同時(shí)促進(jìn)氣體與液體接觸和交換，使氧進(jìn)入液體培養(yǎng)基中，利于菌絲生長(zhǎng)和分生孢子形成。 c.大罐通氣發(fā)酵培養(yǎng)：在大規(guī)模生產(chǎn)菌絲和分生孢子等菌粉時(shí)，必須用大罐通氣發(fā)酵培養(yǎng)法。該方法通氣是采用吸氣或真空泵減壓等方法，經(jīng)過(guò)濾器除雜菌，送入罐內(nèi)液體培 養(yǎng)基中供冬蟲(chóng)夏草菌的生長(zhǎng)發(fā)育。

(2)發(fā)酵工藝流程。自然冬蟲(chóng)夏草分離純化→ 試管斜面種→ 振蕩器液體一級(jí) 種→ 二級(jí)種→ 小型種子發(fā)酵種子罐→ 生產(chǎn)發(fā)酵罐 → 濃縮→ 噴粉干燥→ 成品菌粉。

冬蟲(chóng)夏草菌罐中發(fā)酵要求溫度在20一25℃，罐壓392.3一686.5kPa(0.4一0.7kg/cmz)，通氣量為0.5一1.OVVm*；注入發(fā)酵罐中的液體培養(yǎng)基為罐容的65%一75%為宜。 接種量為10%，攪拌速度為180r/min，培養(yǎng)時(shí)間72一96h，即可放罐濃縮和噴粉。

(3)發(fā)酵培養(yǎng)基多用。鮮馬鈴薯 (去皮)8%，蔗糖2%，玉米淀粉0.5%，蠶蛹粉1%，蛋白胨0.4%，硫酸銨0.2%，pH值5.5一6.0。

(4)發(fā)酵培養(yǎng)成品標(biāo)準(zhǔn)。分生孢子即幾全脫落母體孢子梗，孢子梗數(shù)量增加不明顯 時(shí)，在鏡下計(jì)數(shù)檢查，每毫升含分生孢子18億一25億個(gè)；殘?zhí)堑陀?%；氨基氮低于0.2mg/mL，即可成為成品菌液。

4.冬蟲(chóng)夏草菌回接要點(diǎn) 把有性型或無(wú)性型的冬蟲(chóng)夏草菌孢子回接到寄主昆蟲(chóng)體上，是人工培養(yǎng)有性型冬蟲(chóng)夏草和復(fù)壯無(wú)性型菌種的關(guān)鍵措施。

(1)回接時(shí)期。冬蟲(chóng)夏草回接關(guān)鍵在于選擇寄主昆蟲(chóng)抗菌薄弱時(shí)期，一是蛻皮期；二是幼蟲(chóng)取食活動(dòng)激烈，摩擦損傷率較高時(shí)期。

(2)回接方法。又分兩種。

a.噴霧法：當(dāng)飼養(yǎng)的蝠蛾幼蟲(chóng)達(dá)4一6齡蟲(chóng)，有1/3以上的幼蟲(chóng)蛻皮時(shí)，把幼蟲(chóng)集中，用子囊孢子或者分生孢子對(duì)入5%一10%葡萄糖液噴霧到蟲(chóng)體或食物上，接種后約30min，菌液在蟲(chóng)體上略干，把幼蟲(chóng)放回土壤中任其自然生活。此法感病率高，但缺點(diǎn)是，幼蟲(chóng)不易從土中取出集中，而且集中時(shí)幼蟲(chóng)有互相殘殺的習(xí)性，蟲(chóng)體被咬傷后，易被雜菌感染致死，冬蟲(chóng)夏草菌絲未充滿(mǎn)體腔時(shí)，傷蟲(chóng)就會(huì)腐爛，不能形成僵蟲(chóng) (菌核)。

b.自然接觸法：在大面積半自然土壤中飼養(yǎng)蝠蛾幼蟲(chóng)，定時(shí)取小樣觀察幼蟲(chóng)生長(zhǎng)狀況，當(dāng)大部分幼蟲(chóng)適宜感病時(shí)，用飼料植物浸菌液種植和用細(xì)土拌菌接種，均勻撒入養(yǎng)蟲(chóng)的地表上，然后噴水，使菌滲入土中，幼蟲(chóng)取食活動(dòng)時(shí)接觸感染。此法寄主感染率不太高，但一經(jīng)感染致病，冬蟲(chóng)夏草菌長(zhǎng)勢(shì)好，而且未感病的蝠蛾幼蟲(chóng)能正常生長(zhǎng)，繁殖后代。

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