豬丹毒絲菌C43065株表面保護(hù)性抗原A N端保護(hù)區(qū)在大腸桿菌中的表達(dá)

目的:在大腸桿菌中表達(dá)豬丹毒絲菌C43065株表面保護(hù)性抗原A(SpaA)N端保護(hù)區(qū)(SpaA-N),并檢測其抗原性.方法:利用PCR方法從豬丹毒絲菌C43065株基因組中擴(kuò)增出spaA基因片段,構(gòu)建pMD18-spaA重組質(zhì)粒并對插入片段進(jìn)行測序;以pMD18-spaA重組質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增得到spoA-N基因片段,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-spaA-N,經(jīng)序列測定證實(shí)正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),再經(jīng)IFrG誘導(dǎo)表達(dá)GST-SpaA-N融合蛋白并純化.結(jié)果:擴(kuò)增得到的spaA基因長1 881 bp,編碼由626個氨基酸殘基構(gòu)成的多肽;SDS-PAGE和Western印跡檢測結(jié)果表明,誘導(dǎo)表達(dá)獲得相對分子質(zhì)量約64 000的GST-SpaA-N融合蛋白,該融合蛋白能與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng).結(jié)論:獲得了在大腸桿菌中可溶性表達(dá)的GST-SpaA-N融合蛋白,為進(jìn)一步研究豬丹毒絲菌免疫保護(hù)性抗原奠定了基礎(chǔ).

作 者： 吾魯木汗·那孜爾別克 張磊 何翠 彭清靜 恩特馬克·布拉提白 Wulumuhan Nazierbieke ZHANG Lei HE Cui PENG Qing-Jing Entomack Borrathybay   作者單位： 吉首大學(xué),生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,省部共建生物工程實(shí)驗(yàn)室,湖南,吉首,416000  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(4)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 豬丹毒絲菌   表面保護(hù)性抗原A   原核表達(dá)   抗原性  

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