Stxl-A亞單位的原核表達、復性及抗原性鑒定

目的 構(gòu)建志賀毒素1-A亞單位(Stxl-A)原核表達質(zhì)粒,使其在大腸埃希菌中表達,對表達的重組蛋白進行純化,并探討其抗原性及應(yīng)用價值.方法 以大腸埃希菌0157 DNA為模板擴增Stxl-A基因,重組克隆入原核表達載體pET32a(+),轉(zhuǎn)化大腸埃希菌B121(DE3),異丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)誘導表達,包涵體經(jīng)鎳柱柱上復性和純化,并對純化產(chǎn)物進行Western印跡鑒定.結(jié)果 重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶協(xié)鑒定和測序分析后證實構(gòu)建成功.重組蛋白經(jīng)十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)顯示,其表達量占細菌總蛋白量的15%左右,主要以包涵體形式存在,通過鎳柱柱上復性獲得純化的可溶性Stxl-A蛋白,純度達95%以上,Western印跡檢測顯示特異性條帶.結(jié)論 成功構(gòu)建了pET32a(+)/Stxl-A重組質(zhì)粒,并獲得了具有抗原特異性的可溶性Stxl-A蛋白,為進一步制備抗Stxl-A抗體和研究其生物學功能奠定了基礎(chǔ).

作 者： 葛以躍 崔侖標 史智揚 焦永軍 曾曉燕 戚宇華 唐震 單云峰 吳濤 汪華 GE Yiyue CUI Lunbiao SHI Zhiyang JIAO Yongjun ZENG Xiaoyan QI Yuhua TANG Zheng SHAN Yunfeng WU Tao WANG Hua   作者單位： 江蘇省疾病預防控制中心微生物檢驗科,南京市,210009  刊 名： 醫(yī)學分子生物學雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 5(4)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 大腸埃希菌O157   志賀樣毒素   質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定   原核表達  

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