大腸癌相關(guān)基因PGDH原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及表達

目的 構(gòu)建15-羥基前列腺素脫氫酶(PGDH)原核表達質(zhì)粒,并在大腸桿菌中誘導表達PGDH蛋白.方法 以人正常大腸黏膜組織總RNA為模板,利用RT-PCR擴增PGDH基因的編碼序列,克隆入原核表達載體pBV220,轉(zhuǎn)化E.coli DH5a,經(jīng)溫控誘導表達,并經(jīng)Ni2+ -NTA親和層析純化,目的 蛋白進行SDS-PAGE和Western blot鑒定.結(jié)果 重組質(zhì)粒pBV220-PGDH-Hia6經(jīng)PCR及酶切鑒定,證明質(zhì)粒構(gòu)建正確.經(jīng)溫控誘導后,可表達出相對分子質(zhì)量約為29 000的PGDH-His6蛋白,表達產(chǎn)物以包涵體形式存在,3 h誘導表達量最高,約占菌體總蛋白的30%.Western blot驗證了表達蛋白的特異性.純化后目的 蛋白純度大于95%.結(jié)論 已成功構(gòu)建PGDH原核表達質(zhì)粒,并在大腸桿菌中表達了PGDH蛋白.

作 者： 李美寧 馮燕 常冰梅 解軍 張悅紅 殷云勤 程牛亮   作者單位： 李美寧,馮燕,常冰梅,解軍,張悅紅,程牛亮(山西醫(yī)科大學生物化學與分子生物學教研室,太原,030001)

殷云勤(山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院消化檢驗中心,太原,030001) 

刊 名： 中國生物制品學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(4)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 大腸癌   15-羥基前列腺素脫氫酶   克隆   原核表達  

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