人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆與原核表達(dá)

目的 克隆人胸腺素α原/白介素2 融合基因,構(gòu)建其原核表達(dá)載體并在大腸桿菌系統(tǒng)中有效表達(dá).方法 采用RT-PCR方法,從人白血病細(xì)胞和人T淋巴細(xì)胞中分別擴(kuò)增得到胸腺素α原/白介素2 基因,利用基因重組技術(shù)將融合基因片段重組于pET42a原核表達(dá)載體上,構(gòu)建成pET42a-PI.經(jīng)酶切、測序鑒定后,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosseta,IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)離子交換和分子篩純化后進(jìn)行Western blot分析,通過人外周血單核細(xì)胞玫瑰花結(jié)實(shí)驗(yàn)對融合蛋白進(jìn)行了初步的活性測定.結(jié)果 凝膠電泳顯示PCR產(chǎn)物的長度約750 bp,測序結(jié)果表明,擴(kuò)增片段與預(yù)期序列一致.重組菌在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)相對分子質(zhì)量為28 kDa的蛋白,純化后的融合蛋白能提高人外周血單核細(xì)胞玫瑰花結(jié)形成率,表明具有一定活性.結(jié)論 成功克隆和構(gòu)建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表達(dá)載體,并在原核表達(dá)系統(tǒng)中得到有效表達(dá).

作 者： 黃明 韋劍 周飛燕 HUANG Ming WEI Jian ZHOU Fei-yan   作者單位： 廣州拜迪生物醫(yī)藥有限公司,廣東,廣州,511495  刊 名： 廣東藥學(xué)院學(xué)報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY  年，卷(期)： 2008 24(3)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 胸腺素α原   白介素2   融合蛋白   表達(dá)  

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