HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及篩選有效siRNA的融合載體構(gòu)建

目的:克隆HSV-1 U130 cDNA并測序,構(gòu)建pEGFP-N1-Fi融合表達載體,為靶向UL30基因的siRNA的設(shè)計和篩選奠定基礎(chǔ).方法:從感染HSV-1 F株的病變VERO細胞提取總RNA,二次PCR擴增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1質(zhì)粒,測序鑒定序列;將UL30 cDNA 4個小片段亞克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染VERO細胞,熒光顯微鏡觀察融合蛋白表達情況.結(jié)果:成功克隆出UL30 cDNA,序列對比顯示與基因庫中的HSV-1 F株UL30序列同源性為99.4%;成功構(gòu)建pEGFP-N1-Fi融合表達載體并實現(xiàn)Fi-EGFP融合蛋白的表達.結(jié)論:成功克隆出UL30 cDNA,成功構(gòu)建pEGFP-N1-Fi融合表達載體,為靶向UL30基因的siRNA的設(shè)計和篩選奠定基礎(chǔ).

作 者： 何秋璟 張春龍 仁哲 張美英 朱欽昌 劉秋英 張佩琢 王一飛 HE Qiu-jing ZHANG Chun-long REN Zhe ZHANG Mei-ying ZHU Qin-chang LIU Qiu-ying ZHANG Pei-zhuo WANG Yi-fei   作者單位： 何秋璟,HE Qiu-jing(廣東醫(yī)學(xué)院,廣東東莞,523808;暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究與開放基地,廣東廣州,510632)

張春龍,ZHANG Chun-long(廣東醫(yī)學(xué)院衰老研究所,廣東東莞,523808;暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究與開放基地,廣東廣州,510632)

仁哲,張美英,劉秋英,王一飛,REN Zhe,ZHANG Mei-ying,LIU Qiu-ying,WANG Yi-fei(暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究與開放基地,廣東廣州,510632)

朱欽昌,ZHU Qin-chang(中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究所,廣東廣州,510663)

張佩琢,ZHANG Pei-zhuo(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司,上海,201203) 

刊 名： 生物技術(shù)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 18(3)  分類號： Q782  關(guān)鍵詞： UL30基因/單純皰疹病毒1型   分子克隆   EGFP   融合表達載體  

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