細胞周期蛋白B1、D1和E真核表達載體的構(gòu)建及表達

目的:為研究細胞周期蛋白(cyclin)在腫瘤形成過程中的分子機制,構(gòu)建帶FLAG標簽的細胞周期蛋白B1、D1、E的真核表達載體,并檢測其在293T細胞中的表達.方法:以乳腺cDNA文庫為模板,分別擴增細胞周期蛋白B1、D1、E基因全長編碼區(qū)序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表達載體上;用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因瞬時轉(zhuǎn)染法,將重組正確的表達載體轉(zhuǎn)染293T細胞,檢測細胞中的FLAG融合蛋白的表達.結(jié)果:酶切鑒定和DNA序列分析顯示構(gòu)建了正確的FLAG-Cyclin真核表達載體,Western印跡分析表明克隆的載體都能在真核細胞中表達分子大小相符的重組蛋白.結(jié)論:構(gòu)建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表達載體,為細胞周期蛋白及其相關(guān)蛋白的研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 熊志紅 丁麗華 袁斌 王朝云 李杰萍 楊麗萍 楊智洪 葉棋濃 XIONG Zhi-Hong DING Li-Hua YUAN Bin WANG Zhoo-Yun LI Jie-Ping YANG Li-Ping YANG Zhi-Hong YE Qi-Nong   作者單位： 熊志紅,XIONG Zhi-Hong(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850;解放軍總醫(yī)院第二附屬醫(yī)院,結(jié)核病研究室,北京,100091)

丁麗華,袁斌,王朝云,李杰萍,楊麗萍,楊智洪,葉棋濃,DING Li-Hua,YUAN Bin,WANG Zhoo-Yun,LI Jie-Ping,YANG Li-Ping,YANG Zhi-Hong,YE Qi-Nong(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 細胞周期蛋白   克隆   真核表達  

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