人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表達(dá)、純化及免疫原性研究

目的:通過原核細(xì)胞表達(dá)人免疫缺陷病毒(HIV)Nef抗原,制備特異抗血清,為Nef抗原檢測提供技術(shù)方法.方法:以HIV Botswana毒株基因組為模板,用PCR法獲得Nef蛋白編碼基因,將其克隆到pET30a載體中,在大腸桿菌中表達(dá)Nef融合蛋白;用純化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠獲得抗血清,用真核表達(dá)的Nef抗原對其特異性進(jìn)行分析.結(jié)果:構(gòu)建的Nef融合基因在大腸桿菌中獲得表達(dá),相對分子質(zhì)量約為36x103,免疫BALB/c小鼠獲得針對融合蛋白的高效價(jià)抗血清,EUSA抗體滴度為1:6 400;免疫熒光和Western blot檢測表明,該抗血清能特異地與重組痘苗病毒表達(dá)的Nef抗原反應(yīng).結(jié)論:在大腸桿菌中表達(dá)了HIV Nef融合蛋白,制備了Nef融合蛋白的高效價(jià)小鼠免疫血清,該血清能特異性識別HIV Nef抗原,為HIV Nef抗原檢測提供了技術(shù)方法.

作 者： 陸柔劍 齊建國 鄧瑤 王世峰 王文玲 辛偉 李仁清 阮力 LU Rou-Jian QI Jian-Guo DENG Yao WANG Shi-Feng WANG Wen-Ling Xin Wei LI Ren-Qing RUAN Li   作者單位： 中國疾病預(yù)防控制中心,病毒病預(yù)防控制所,北京,100052  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 人免疫缺陷病毒   Nef抗原   原核表達(dá)   抗血清  

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