人β干擾素-血清白蛋白融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達(dá)

利用重疊PCR技術(shù)在體外拼接IFNβ和HSA基因,將得到的融合基因插入到畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K中,置于啟動(dòng)子AOX1和α交配因子信號(hào)肽的作用下,分泌表達(dá)融合蛋白IFNβ-HSA.重組質(zhì)粒pPIC9K-IFNβ-HSA經(jīng)SalI線(xiàn)性化,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母KM71,經(jīng)G418篩選得到高拷貝轉(zhuǎn)化子.PCR鑒定后,用甲醇誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE和Western blot分析表達(dá)的融合蛋白IFNβ-HSA,表明該蛋白分子量約為90kDa,且具有HSA的抗原性;用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定發(fā)酵液上清中融合蛋白的干擾素活性約為640IU/ml.

作 者：   作者單位：   刊 名： 中國(guó)生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(7)  分類(lèi)號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： β干擾素   巴斯德畢赤酵母   融合蛋白  

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