重組羧肽酶B及其包涵體溶解性的研究

目的 構(gòu)建重組羧肽酶B(rCPB)的表達(dá)質(zhì)粒和表達(dá)菌株,表達(dá)羧肽酶B(CPB),并對表達(dá)CPB包涵體的溶解性進(jìn)行研究.方法 構(gòu)建CPB重組質(zhì)粒pET-21a-CPB,將其導(dǎo)入表達(dá)菌株BL21(DE3)中,分別在25℃和37℃進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);所得包涵體分別用不同濃度尿素添加不同還原劑溶解,以溶液中的蛋白質(zhì)濃度判定其溶解性,利用非還原SDS-PAGE分析其溶解性提高的原因.結(jié)果 誘導(dǎo)后生長溫度不同對rCPB包涵體的純度及后期處理均有影響;rCPB包涵體在10 mol/L尿素溶液中的溶解度比在8 mol/L尿素溶液中提高2～3倍;添加0.75%β-巰基乙醇能顯著改善rCPB包涵體的溶解效果.經(jīng)非還原SDS-PAGE分析,添加β-巰基乙醇后,溶解rCPB聚體的含量減少.結(jié)論 成功地表達(dá)了rCPB,并通過實(shí)驗(yàn)提高了rCPB包涵體的溶解度.

作 者： 安宇 李節(jié) 李素霞 趙健 范立強(qiáng) 袁勤生 AN Yu LI Jie LI Su-xia ZHAO Jian FAN Li-qiang YUAN Qin-sheng   作者單位： 華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200237  刊 名： 食品與藥品A  ISTIC 英文刊名： FOOD AND DRUG  年，卷(期)： 2007 9(10)  分類號： Q556  關(guān)鍵詞： 重組羧肽酶B   包涵體   變性   還原變性  

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