鈉通道SCN1A基因短發(fā)夾RNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其在HEK293細(xì)胞中的沉默效果

目的 采用人SCN1A基因非保守區(qū)DNA構(gòu)建短發(fā)夾RNA(shRNA)穩(wěn)定表達(dá)的重組質(zhì)粒,在HEK293細(xì)胞中抑制SCN1A基因表達(dá).方法 PCR分別正反向擴(kuò)增SCN1A基因特異序列,構(gòu)建成一個(gè)綠色光蛋白(GFP)與發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(shRNA)融合表達(dá)的重組質(zhì)粒pEGFP-SCN1A-shRNA;該質(zhì)粒和對(duì)照質(zhì)粒(pCMV-EGFP)分別與SCN1A基因表達(dá)質(zhì)粒(pCMV-SCN1A)共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞株,采用半定量RT-PCR及雙熒光共定位法鑒定SCN1A基因的表達(dá)情況.結(jié)果 與對(duì)照相比較,shRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞中SCN1A基因mRNA表達(dá)量下調(diào)90%;雙熒光共定位顯示實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性細(xì)胞中只檢測(cè)到GFP蛋白,未能檢測(cè)到Nav1.1,而對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞中能同時(shí)檢測(cè)到GFP蛋白和Nav1.1.結(jié)論 shRNA表達(dá)質(zhì)粒在培養(yǎng)細(xì)胞中能有效地抑制SCN1A基因的表達(dá).該質(zhì)粒可進(jìn)一步改造成腺病毒表達(dá)載體,在動(dòng)物腦組織中進(jìn)行永久性表達(dá),建立癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的動(dòng)物模型,可望成為致病機(jī)理研究和開(kāi)發(fā)新治療途徑的工具.

作 者： 龍躍生 孫衛(wèi)文 趙綺華 曾濤 廖衛(wèi)平   作者單位： 廣州醫(yī)學(xué)院,第二附屬醫(yī)院,神經(jīng)科學(xué)研究所,廣東,廣州,510260  刊 名： 南華大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  英文刊名： JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)  年，卷(期)： 2009 37(3)  分類號(hào)： Q7  關(guān)鍵詞： RNA干擾   鈉通道   癲癇  

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