修飾的含前S1、前S2免疫決定簇乙肝表面抗原融合多肽在畢赤酵母中的共表達(dá)

用BamHⅠ和BglⅡ雙酶切合SS2嵌合基因片段的重組質(zhì)粒pAO815-SS2,分離含AOX1啟動(dòng)子區(qū)、SS2嵌合基因和AOX1轉(zhuǎn)錄終止序列的表達(dá)盒.將分離的BamHⅠ-BglⅡ表達(dá)盒與經(jīng)BamHⅠ線性化的pAO815-SS1質(zhì)粒連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10F',提取質(zhì)粒,用BamHⅠ和BglⅡ雙酶切分析重組質(zhì)粒并篩選正向插入SS2表達(dá)盒的重組子.將該重組質(zhì)粒用電轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入Pichia pastoris GS115細(xì)胞,經(jīng)表型篩選、小試表達(dá)和產(chǎn)物鑒定,構(gòu)建了重組表達(dá)菌株GS115-SS1S2.重組菌株經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后制備抗原粗提液,進(jìn)一步進(jìn)行ELISA和Western blot鑒定.ELISA結(jié)果顯示,產(chǎn)物同時(shí)具有S、前S1和前S2抗原性.Western blot分析進(jìn)一步表明,表達(dá)產(chǎn)物既能與S抗體結(jié)合,也能與前S1和前S2抗體結(jié)合.工程菌經(jīng)高密度發(fā)酵,表達(dá)量達(dá)到300～600mg/L.抗原經(jīng)純化后進(jìn)行電鏡觀察,形成直徑20～35nm的球形顆粒.純化抗原經(jīng)SDS-PAGE分析,SS1和SS2多肽仍然保持完整,基本無降解.

作 者： 譚昌耀 蔣麗明 葛永紅 袁進(jìn) 金甌 胡波 TAN Chang-Yao JIANG Li-Ming GE Yong-Hong YUAN Jin JIN Ou HU Bo   作者單位： 成都生物制品研究所生物技術(shù)研究室,成都,610023  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 前S1   前S2   嵌合基因  

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