TRAIL蛋白原核表達載體的構(gòu)建及表達研究

目的 利用蛋白自剪切功能原核表達系統(tǒng)構(gòu)建腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表達載體,并進行表達條件優(yōu)化和初步純化.方法 設(shè)計基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段雙鏈cDNA序列,將其連接于克隆載體pMD18-T中;將酶切、純化的TRAIL基因與經(jīng)相同處理的載體pTWIN1相連接,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌JM109,篩選陽性重組子.將鑒定(酶切及序列分析)陽性的重組子質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸埃希菌ER2566表達菌中, 采用蛋白質(zhì)SDS-PAGE 電泳方法 分析不同濃度誘導(dǎo)劑異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同誘導(dǎo)溫度、不同誘導(dǎo)時間下目的蛋白表達情況.結(jié)果 成功獲得了包含TRAIL基因胞膜外段的雙鏈cDNA序列,酶切及序列分析證實成功構(gòu)建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表達載體.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃誘導(dǎo)過夜(14～16 h),目的蛋白獲得較高表達量,且大部分為可溶性蛋白.結(jié)論 采用大腸埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白獲得高表達,經(jīng)簡單后續(xù)處理即可獲得不含任何額外氨基酸的可溶性目的蛋白.

作 者： 楊文理 陳守春 陳毅榮 覃揚 YANG Wen-li CHEN Shou-chun CHEN Yi-rong QIN Yang   作者單位： 楊文理,覃揚,YANG Wen-li,QIN Yang(四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院,生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,成都,610041)

陳守春,陳毅榮,CHEN Shou-chun,CHEN Yi-rong(地奧集團新藥研究所) 

刊 名： 四川大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 37(5)  分類號： Q5  關(guān)鍵詞： 腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體   蛋白內(nèi)含子   原核表達  

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