qa-3稀有密碼子和mRNA結(jié)構(gòu)改造及其在大腸桿菌中的高效表達(dá)

奎尼酸脫氫酶的高表達(dá)是奎尼酸生物合成的代謝工程研究的的基因qa-3在大腸桿菌中不表達(dá),根據(jù)大腸桿菌密碼子使用頻率分析qa-3基因,發(fā)現(xiàn)有27個(gè)稀有密碼子,其中編碼Arg(R)的有8個(gè),編碼Gly(G)的有9個(gè).編碼精氨酸的AGG(AGA)兩個(gè)稀有密碼子緊密相連(R區(qū)),另外還有個(gè)相對(duì)比較集中的GGG密集區(qū)G區(qū).進(jìn)一步通過計(jì)算機(jī)分析其qa-3基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)改變5′和3′末端個(gè)別堿基對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3 kJ/mol降低到最小-80.5 kJ/mol,從而大大減少mRNA兩端二級(jí)結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,而僅僅改變R區(qū)和G區(qū)的稀有密碼子自由能變化很小.通過對(duì)該基因密碼子改造和優(yōu)化5′和3′末端對(duì)其mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響,在大腸桿菌中表達(dá)真菌的基因qa-3,并測(cè)到了奎尼酸脫氫酶活性,為構(gòu)建產(chǎn)奎尼酸工程菌株奠定基礎(chǔ).

作 者： 劉禮兵 劉云 何華慶 李永輝 徐琪壽 LIU Li-Bing LIU Yun HE Hua-Qing LI Yong-Hui XU Qi-Shou   作者單位：   刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： qa-3   密碼子   mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)   奎尼酸脫氫酶  

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