抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體的篩選和鑒定

目的:從全人源噬菌體抗體庫(kù)中篩選抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)的抗體.方法:從HeLa細(xì)胞中提取總RNA,分兩段反轉(zhuǎn)錄TfR胞外區(qū)cDNA,經(jīng)兩輪PCR后,獲得胞外區(qū)基因.測(cè)序正確后,將其插入表達(dá)載體pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表達(dá).目的蛋白通過(guò)Ni-NTA金屬螯合層析柱進(jìn)行純化、復(fù)性.用復(fù)性的TfR包被免疫管,從庫(kù)容為1013 cfu/L的全合成人源噬菌體單鏈抗體庫(kù)中,篩選抗TfR的抗體.結(jié)果:得到約1.9 kb的TfR胞外區(qū)基因,該基因以包涵體的形式在大腸桿菌中表達(dá);利用純化、復(fù)性的TfR從抗體庫(kù)中篩選到了8個(gè)可與人TfR特異性結(jié)合的單鏈抗體.結(jié)論:利用TfR在大腸桿菌表達(dá)的復(fù)性產(chǎn)物,可以篩選到與天然TfR特異性結(jié)合的單鏈抗體.

作 者： 趙莉霞 顏冰 朱恒奇 許龍 黃培堂 ZHAO Li-xia YAN Bing ZHU Heng-qi XU Long HUANG Pei-tang   作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分類號(hào)： Q813.2  關(guān)鍵詞： 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   噬菌體抗體庫(kù)   篩選   單鏈抗體  

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