豬γ干擾素基因的合成、表達及純化

目的 通過人工合成豬γ干擾素(poIFN-γ)基因的編碼序列,提高目的蛋白的表達.方法 根據poIFN-γ的氨基酸序列,選擇大腸桿菌所偏愛的密碼子,設計并合成了24個寡核苷酸片段.通過重疊區(qū)擴增法,利用PCR合成poIFN-γ的成熟蛋白編碼基因,克隆人pGEM-7Zf(+)載體,轉化大腸桿菌TG1.經測序證實后,構建原核表達載體pBV222/poIFN-γ,并轉化大腸桿菌DH5γ,經誘導表達后,進行SDS-PAGE分析及純化.結果 酶切及測序結果表明表達載體構建成功,工程菌誘導表達后的電泳圖譜在相對分子質量約16 500的位置出現明顯的目的蛋白條帶,表達產物主要以包涵體形式存在,約占菌體總蛋白的55%,占包涵體中總蛋白的80%,經Ni2+-NTA親和層析純化,純度達90%以上.結論 已獲得了純度較高的目的蛋白,為下一步對豬γ干擾素進行復性及活性研究奠定了基礎.

作 者： 王云龍 李玲玲 李晨陽 吳陽   作者單位： 王云龍,李晨陽(鄭州職業(yè)技術學院,鄭州,450121;河南省生物工程技術研究中心,鄭州,450002)

李玲玲(河南省生物工程技術研究中心,鄭州,450002;河南師范大學生命科學學院,新鄉(xiāng),453007)

吳陽(河南省生物工程技術研究中心,鄭州,450002;鄭州輕工業(yè)學院食品與生物工程學院,鄭州,450002) 

刊 名： 中國生物制品學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2007 20(7)  分類號： Q786 S85  關鍵詞： 豬γ干擾素   基因合成   表達   純化  

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