乙酰肝素酶大亞基在畢赤酵母中的表達

目的 構建乙酰肝素酶(HPA)大亞基片段真核表達質粒,并在畢赤酵母中表達重組蛋白.方法 根據GenBank中登錄的HPA大亞基基因序列設計引物,PCR方法擴增肝素酶基因,構建畢赤酵母真核表達質粒pPICZαA-HPA.電擊穿孔法轉化感受態(tài)畢赤酵母SDM1168,斑點免疫印跡法篩選重組菌株,PCR法鑒定陽性克隆.甲醇誘導表達重組蛋白,Western blot鑒定表達產物.結果 構建的重組真核表達質粒經雙酶切及測序鑒定證明構建正確;斑點免疫印跡法篩選出的9個單菌落經PCR擴增,均可見1 161 bp的目的基因條帶;表達產物經Western blot分析,具有良好的反應原性,表達量約為μg/L.結論 已成功構建了HPA大亞基片段真核表達質粒pPICZαA-HPA,并在畢赤酵母SDM1168中分泌表達了HPA大亞基.

作 者： 季穎 邱偉成 高新 付潔 王清清 宋海峰   作者單位： 季穎,高新,付潔,王清清,宋海峰(軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所,北京,100850)

邱偉成(軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所,北京,100850;首都師范大學生命科學學院,北京,100048) 

刊 名： 中國生物制品學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2010 23(3)  分類號： Q786  關鍵詞： 乙酰肝素酶   大亞基   畢赤酵母   表達   Heparanase (HPA)   C-terminal subunit   Pichia pastoris   Expression  

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