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正交優(yōu)化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系
根據(jù)正交試驗設(shè)計的原理,設(shè)計了探索性正交試驗和細(xì)調(diào)性正交試驗來確定沙打旺ISSR-PCR體系中各成分的濃度.得到既穩(wěn)定又能擴出最多條帶的適合沙打旺的ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系,即20 μl的反應(yīng)體系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3 μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl.然后對沙打旺ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系進(jìn)行梯度退火試驗,得到這條引物的最佳退火溫度為54.1 ℃.這一最佳體系的建立為今后利用ISSR標(biāo)記技術(shù),研究沙打旺的遺傳多樣性提供了標(biāo)準(zhǔn)化程序.
作 者： 陳志宏 黃琳凱 張新全 王志剛 作者單位： 陳志宏,王志剛(全國畜牧獸醫(yī)總站畜禽牧草種質(zhì)資源保存利用中心,北京,100094)黃琳凱,張新全(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院草業(yè)科學(xué)系,四川雅安,625014)
刊 名： 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 34(13) 分類號： Q946-33 關(guān)鍵詞： 沙打旺 ISSR 正交優(yōu)化 反應(yīng)體系【正交優(yōu)化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系】相關(guān)文章：
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