低氧反應(yīng)元件調(diào)控下h-VEGF165基因表達及其蛋白產(chǎn)物的延遲消失

血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)轉(zhuǎn)基因可促進心肌缺血區(qū)血管生成,改善心臟功能,然而長期高水平表達又會引起諸多副作用.為調(diào)控VEGF表達,在啟動子區(qū)加入低氧反應(yīng)元件(hypoxic response element,HRE)作為調(diào)控開關(guān),研究氧環(huán)境對VEGF基因mRNA及蛋白產(chǎn)物表達的影響.重組腺相關(guān)病毒(recombinant adeno-associ-ated virus,rAAV)作為載體(rAAV-HRE-h-VEGF165),轉(zhuǎn)染離體培養(yǎng)大鼠心肌細胞,在常氧/缺氧(氧濃度1%)/缺氧復(fù)氧條件下進行培養(yǎng),用酶聯(lián)免疫特異性測定(enzymelinkedimmunosorbent assay,ELISA)方法檢測培養(yǎng)液h-VEGF165蛋白濃度,細胞免疫熒光染色觀測細胞內(nèi)h-VEGF165蛋白表達,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法檢測細胞h-VEGF165 mRNA表達.結(jié)果顯示:未轉(zhuǎn)染組、常氧培養(yǎng)組均無h-VEGF165mRNA及其蛋白表達;缺氧培養(yǎng)組h-VEGF165mRNA及蛋白均表達;缺氧復(fù)氧4 h組的h-VEGF165mRNA消失,培養(yǎng)液中h-VEGF165蛋白減少,細胞內(nèi)h-VEGF165蛋白存在;缺氧復(fù)氧8 h及12 h組的h-VEGF165mRNA消失,培養(yǎng)液和細胞內(nèi)h-VEGF165蛋白均消失.研究表明,在HRE調(diào)控下,缺氧可促使h-VEGF165基因表達,復(fù)氧后,h-VEGF165mRNA表達停止,蛋白產(chǎn)物延遲消失.

作 者： 張宜乾 張中明 閆英群 董紅燕 ZHANG Yi-Qian ZHANG Zhong-Ming YAN Ying-Qun DONG Hong-Yan   作者單位： 張宜乾,張中明,閆英群,ZHANG Yi-Qian,ZHANG Zhong-Ming,YAN Ying-Qun(徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院胸心外科)

董紅燕,DONG Hong-Yan(徐州醫(yī)學院神經(jīng)生物研究中心,徐州,221002) 

刊 名： 生理學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA PHYSIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 58(3)  分類號： Q5  關(guān)鍵詞： 血管內(nèi)皮生長因子   低氧反應(yīng)元件   心肌細胞  

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