人骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及鑒定

目的:體外分離、培養(yǎng)、鑒定人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSC).方法:利用密度梯度離心法分離出人骨髓單個核細胞(MNC),通過貼壁篩選法建立hBMSC的體外培養(yǎng)體系,并通過一系列檢測方法對所培養(yǎng)的細胞進行鑒定.結(jié)果:細胞主要呈"成纖維樣",但體積較大、形狀不規(guī)則、細胞質(zhì)突起多,細胞核大而疏松,核仁明顯.流式細胞儀檢測:CD34陽性率為2.09%、CD29陽性率為94.46%;CD54及CD105表達陽性.細胞周期及透射電鏡檢測提示細胞處于相對原始狀態(tài).免疫細胞化學(xué)染色顯示:CD14、CD45、膠原蛋白Ⅱ呈陰性;CD106、CD166、纖維連接蛋白、波形蛋白及膠原纖維酸性蛋白呈陽性.細胞化學(xué)染色:糖原染色呈強陽性;堿性磷酸酶染色呈陰性.通過誘導(dǎo)分化培養(yǎng)可誘導(dǎo)出成骨細胞.結(jié)論:成功建立了穩(wěn)定的hBMSC體外培養(yǎng)體系,按照此培養(yǎng)體系進行培養(yǎng)可獲得hBMSC.hBMSC可傳代培養(yǎng),但在培養(yǎng)過程中細胞逐漸出現(xiàn)老化現(xiàn)象,且不能凍存.

作 者： 梁雪 粟永萍 孔佩艷 陳幸華 彭賢貴 徐輝 曾東風(fēng) 艾國平 LIANG Xue SU Yong-ping KONG Pei-yan CHEN Xing-hua PENG Xian-gui XU Hui ZENG Dong-feng AI Guo-ping   作者單位： 梁雪,孔佩艷,陳幸華,彭賢貴,曾東風(fēng),LIANG Xue,KONG Pei-yan,CHEN Xing-hua,PENG Xian-gui,ZENG Dong-feng(第三軍醫(yī)大學(xué)附屬新橋醫(yī)院血液科,重慶,400037)

粟永萍,徐輝,艾國平,SU Yong-ping,XU Hui,AI Guo-ping(預(yù)防醫(yī)學(xué)院解放軍復(fù)合傷研究所創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室,重慶,400038) 

刊 名： 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES  年，卷(期)： 2007 20(5)  分類號： Q813.11  關(guān)鍵詞： 人骨髓間充質(zhì)干細胞   造血微環(huán)境   細胞培養(yǎng)  

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