改進(jìn)Tripure法提取鑒定小鼠組織總RNA

目的改進(jìn)從新鮮動(dòng)物組織提取、鑒定純度及完整性較高總RNA的技術(shù)方法.方法實(shí)驗(yàn)于2005-05-16/08-25在解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院創(chuàng)傷分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行.用健康4～6周齡昆明種小鼠70只,頸椎脫臼法處死,取肺組織約100 mg.在Tripure Isolation試劑說(shuō)明書(shū)基礎(chǔ)上,對(duì)提取組織RNA的操作步驟進(jìn)行調(diào)整改進(jìn),包括:①迅速組織取材,可不將組織切割成碎塊而直接中速勻漿.②勻漿頭夾層每次使用前后一定要徹底清洗干凈;新鮮組織使用5 mL離心管勻漿.③吸取含RNA的三相分層上清液時(shí),吸取250μL即可.④RNA沉淀后,用無(wú)水乙醇再洗1次.并對(duì)常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳做適當(dāng)改進(jìn)用于鑒定RNA的質(zhì)量,改進(jìn)的電泳方法:①電泳RNA所用器械均用肥皂水、體積分?jǐn)?shù)為0.03的H2O2清洗2遍,1g/L焦碳酸二乙酯處理的滅菌雙蒸水沖洗,室溫晾干備用.②用新配的0.5×TBE配制10g/L瓊脂糖凝膠,倒膠時(shí)Goldview核酸染料直接加入凝膠中.③瓊脂糖凝膠板放入電泳槽后再加入經(jīng)滅菌的0.5×TBE.電泳電壓5 V/cm,電泳時(shí)間1.5 h后凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄.結(jié)果①取提取的總RNA 5 μg進(jìn)行電泳1.5 h后,可見(jiàn)28S,18S,5S 3條清晰的RNA條帶,其中28S條帶的亮度約為18S條帶的2倍,5S條帶隱約可見(jiàn).②用該法提取的新鮮組織RNA,經(jīng)電泳鑒定及反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè),顯示RNA的純度及模板性較好.全部操作過(guò)程可在2.5 h內(nèi)完成.結(jié)論用改進(jìn)方法提取的新鮮組織RNA質(zhì)量穩(wěn)定,電泳鑒定快速可靠.

作 者： 王晉 王建民 茍?jiān)��?王燕   作者單位： 王晉(武裝警察部隊(duì)青海省總隊(duì)醫(yī)院外二科,青海省,西寧市,810000)

王建民,茍?jiān)��?王燕(解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所六室,重慶市,400042) 

刊 名： 中國(guó)臨床康復(fù)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION  年，卷(期)： 2006 10(25)  分類號(hào)： Q81  關(guān)鍵詞： RNA   逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)   電泳  

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