SUMO-1小干擾RNA的構(gòu)建及其干擾效果檢測

目的:構(gòu)建小泛素相關(guān)修飾物-1(SUMO-1)基因的小干擾RNA(siRNA),并檢測其對SUMO-1基因表達(dá)的干擾效果.方法:根據(jù)SUMO-1基因序列設(shè)計(jì)一條合理的SUMO-1 siRNA,并將其克隆到pSliencer2.1-U6 neo載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,挑取陽性菌落進(jìn)行酶切和測序鑒定;將構(gòu)建的SUMO-1 siRNA重組質(zhì)粒單獨(dú)轉(zhuǎn)染或與帶HA標(biāo)簽的SUMO-1表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)染人胚腎293T細(xì)胞,收集細(xì)胞裂解物,以抗HA和SUMO-1的抗體用Westem印跡檢測siRNA的干擾效果.結(jié)果:構(gòu)建了SUMO-1 siRNA重組質(zhì)粒,干擾效果可達(dá)80%以上.結(jié)論:構(gòu)建的SUMO-1 siRNA為進(jìn)一步進(jìn)行蛋白質(zhì)SUMO-1化修飾的研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 任雯 韋瑋 葉棋濃 REN Wen WEI Wei YE Qi-Nong   作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： SUMO化   SUMO-1   小干擾RNA   表達(dá)載體  

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