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羽衣甘藍(lán)S13-b位點(diǎn)受體激酶基因的克隆及激酶結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)
目的:分離羽衣甘藍(lán)S13-b位點(diǎn)受體激酶(SRK13-b)基因并進(jìn)行序列及結(jié)構(gòu)域分析,構(gòu)建SRK13-b結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)載體并進(jìn)行重組蛋白質(zhì)的原核表達(dá)和純化.方法:提取羽衣甘藍(lán)S13-bS13-b自交不親和系花期柱頭的RNA,用RTPCR法分離SRK13-b基因;將編碼SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域的序列插入大腸桿菌表達(dá)載體pET-14b中,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-SRK13-bCT,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株,經(jīng)0.1 mmol/L IPTG誘導(dǎo),用Ni-NTA親和層析柱對(duì)SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域蛋白進(jìn)行純化.結(jié)果:分離獲得羽衣甘藍(lán)SRK13-b基因的長(zhǎng)度為2571 bp,編碼856個(gè)氨基酸,GenBank收錄號(hào)為EU180597;對(duì)SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域蛋白進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)及純化,SDS-PAGE顯示相對(duì)分子質(zhì)量約43×103的蛋白質(zhì)特異表達(dá),對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,獲得了SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域的融合蛋白.結(jié)論:羽衣甘藍(lán)SRK13-b基因的克隆及激酶結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá),為研究SRK的功能及自交不親和性奠定了基礎(chǔ).
作 者： 藍(lán)興國(guó) 楊佳 王艷紅 李玉花 LAN Xing-Guo YANG Jia WANG Yan-Hong LI Yu-Hua 作者單位： 東北林業(yè)大學(xué),生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江,哈爾濱,150040 刊 名： 生物技術(shù)通訊 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分類號(hào)： Q78 關(guān)鍵詞： 羽衣甘藍(lán) 自交不親和 S13-b位點(diǎn)受體激酶 原核表達(dá) 純化【羽衣甘藍(lán)S13-b位點(diǎn)受體激酶基因的克隆及激酶結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)】相關(guān)文章：
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