hERβ全長基因真核表達載體pEGFP-C1-hERβ的構(gòu)建及其在PC-3M細胞中的表達

目的:構(gòu)建人雌激素受體β(hERβ)全長基因的真核表達載體pEGFP-C1-hERβ,并轉(zhuǎn)染激素非依賴性前列腺癌細胞株P(guān)C-3M.方法:采用RT-PCR法從卵巢囊腫患者切除的部分正常卵巢組織中釣取hERβ全長基因(1 593 bp),與pMD18-T載體連接做全自動序列測定.將測序正確的克隆質(zhì)粒pMD18-T-hERβ和表達載體pEGFP-C1分別用HindⅢ和BamH Ⅰ進行雙酶切,應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建hERβ全長基因真核表達載體pEGFP-C1-hERβ.質(zhì)粒經(jīng)HindⅢ和BamHⅠ雙酶切和PCR電泳鑒定后,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染PC-3M細胞.結(jié)果:重組質(zhì)粒經(jīng)限制性酶切鑒定得到與hERβ全長基因長度一致(1 612 bp)的酶切產(chǎn)物;測序分析證實,PCR產(chǎn)物與GenBank上登錄的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的擴增和表達載體的構(gòu)建;熒光顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染的PC-3M細胞有綠色熒光蛋白的表達;PCR測定分析,轉(zhuǎn)染細胞hERβ的表達增加.結(jié)論:構(gòu)建完成真核表達載體pEGFP-C1-hERβ,hERβ基因在PC-3M細胞內(nèi)成功表達.

作 者： 李峰 邵月婷 何靜春 秦宣鋒 陳超 王馭良 孫連坤 李揚 趙雪儉 LI Feng SHAO Yue-ting HE Jing-chun QIN Xuan-feng CHEN Chao WANG Yu-liang SUN Lian-kun LI Yang ZHAO Xue-jian   作者單位： 李峰,邵月婷,何靜春,孫連坤,李揚,趙雪儉,LI Feng,SHAO Yue-ting,HE Jing-chun,SUN Lian-kun,LI Yang,ZHAO Xue-jian(吉林大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病理生理學教研室,吉林大學前列腺疾病防治研究中心,吉林,長春,130021)

秦宣鋒,陳超,王馭良,QIN Xuan-feng,CHEN Chao,WANG Yu-liang(吉林大學臨床醫(yī)學一系2002級) 

刊 名： 吉林大學學報（醫(yī)學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)  年，卷(期)： 2006 32(2)  分類號： Q786 Q785  關(guān)鍵詞： 受體,雌激素   激素非依賴性前列腺癌細胞   前列腺腫瘤   真核表達   遺傳載體   轉(zhuǎn)染  

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