用小雙鏈RNA抑制轉(zhuǎn)化入HUVEC中綠色熒光蛋白基因的表達(dá)

目的:建立穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),研究小干擾RNA(siR-NA)對(duì)HUVECs中GFP表達(dá)的抑制作用.方法:用lipofectamine2000將編碼GFP的質(zhì)粒pN3-EGFP轉(zhuǎn)入HUVECs中.用G418篩選并維持已轉(zhuǎn)化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP).利用T7RNA轉(zhuǎn)錄試劑盒,制備可抑制GFP基因表達(dá)的siRNA(GFPsiRNA)和無(wú)關(guān)對(duì)照的RNA(control siRNA).用oligofectamine將siRNA轉(zhuǎn)入HUVEC-GFP中.繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,檢測(cè)HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表達(dá)水平.結(jié)果:用G418篩選獲得了HUVEC-GFP細(xì)胞株,可以觀察到GFP的穩(wěn)定表達(dá).HUVEC-GFP轉(zhuǎn)化siRNA后48 h,GFP的熒光強(qiáng)度明顯下降,而對(duì)照組的熒光強(qiáng)度無(wú)明顯下降.半定量RT-PCR檢測(cè)顯示,GFPsiRNA對(duì)GFP mRNA表達(dá)有較強(qiáng)的抑制作用,抑制率達(dá)40%,而control siRNA對(duì)GFPmuRNA表達(dá)水平無(wú)明顯的抑制作用.結(jié)論:利用體外轉(zhuǎn)錄合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表達(dá).

作 者： 單志新 林秋雄 余細(xì)勇 鄧春玉 鄭猛 譚虹虹 符永恒 楊敏 林曙光 SHAN Zhi-xin LIN Qiu-xiong YU Xi-yong DENG Chun-yu ZHENG Meng TAN Hong-hong FU Yong-heng YANG Min LIN Shu-guang   作者單位： 廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心,廣東,廣州,510080  刊 名： 中國(guó)病理生理雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： RNA干擾   綠色熒光蛋白   人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞   脂質(zhì)體  

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