真核表達(dá)質(zhì)粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號(hào)肽的Calreticulin(120～180 aa)的構(gòu)建及其在COS-7細(xì)胞中的表達(dá)

目的構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號(hào)肽的Calreticulin(120～180 aa)并了解其在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá).方法將帶有Vasostatin自身信號(hào)肽的Calreticulin(120～180 aa)的RT-PCR產(chǎn)物克隆至pcDNA31(+)真核表達(dá)載體上,經(jīng)酶切鑒定及測(cè)序分析證明構(gòu)建成功后,以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞COS-7,并行Western法檢測(cè).結(jié)果成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號(hào)肽的Calreticulin(120～180 aa),將之轉(zhuǎn)染體外的真核COS-7細(xì)胞后,在其上清液中,檢測(cè)到目的蛋白質(zhì).結(jié)論該構(gòu)建的質(zhì)粒可在真核細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白質(zhì),這為基因治療視網(wǎng)膜新生血管類病奠定了一定基礎(chǔ).

作 者： 劉建巨 吳雅臻 李光宇 范斌   作者單位： 吉林大學(xué)第二醫(yī)院眼科醫(yī)院,吉林,長(zhǎng)春,130041  刊 名： 中國(guó)老年學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(2)  分類號(hào)： Q78 R318.12  關(guān)鍵詞： Calreticulin(120～180aa)   COS-7細(xì)胞   基因克隆   真核表達(dá)  

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