糞腸球菌中具有啟動功能的DNA片段的捕獲及鑒定

PCR擴增來自質(zhì)粒pUC119的β-內(nèi)酰胺酶基因(bla)作報告基因,克隆進質(zhì)粒pNZ8037上的能被Nisin誘導的啟動子PnisA下游,構(gòu)建了糞腸球菌啟動功能片段探測載體pNZ-bla.利用該探測載體從糞腸球菌染色體總DNA中克隆到了能在糞腸球菌中表達的一系列具有啟動功能的DNA片段,將包含克隆片段的pNZ-P-bla6質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化糞腸球菌,培養(yǎng)轉(zhuǎn)化子并檢測其抗氨芐強度,結(jié)果表明其抗氨芐強度大于Nisin誘導的含pNZ-bla質(zhì)粒的糞腸球菌.表明克隆的功能片段啟動能力強于PnisA.在pNZ-P-bla6的啟動功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之間接上綠色熒光蛋白基因作為標記,構(gòu)建表達綠色熒光蛋白的質(zhì)粒載體pNZ-P-gfp并導入糞腸球菌中,共聚焦顯微鏡下可以觀察到綠色熒光蛋白的表達.

作 者： 黃路標 張伯生 任大明 HUANG Lu-biao ZHANG Bo-sheng REN Da-ming   作者單位： 復旦大學,生命科學學院,遺傳學研究所,遺傳工程國家重點實驗室,上海,200433  刊 名： 復旦學報（自然科學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 45(3)  分類號： Q781  關(guān)鍵詞： 乳酸菌   糞腸球菌   啟動子   克隆載體   GFP  

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