高質(zhì)量甘蔗基因組DNA的簡(jiǎn)便快速提取方法研究

甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物.目前,甘蔗分子生物學(xué)研究已成為甘蔗研究的熱點(diǎn)之一.基因組DNA的提取是進(jìn)行甘蔗分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ).本研究設(shè)計(jì)含一系列SDS濃度的提取液,同時(shí)設(shè)加液氮和不加液氮研磨的對(duì)比試驗(yàn),提取甘蔗不同部位葉片的基因組DNA并進(jìn)行產(chǎn)量和純度檢測(cè)以及分子生物學(xué)分析.結(jié)果表明,所有提取液提取的甘蔗基因組DNA純度均很高,A260/A280在1.8-2.0之間,A260/A230大于2,但提取液I(0.75% SDS)提取的甘蔗基因組DNA產(chǎn)量較低;加液氮與否對(duì)甘蔗基因組DNA的提取產(chǎn)量和純度沒有影響;以提取的甘蔗基因組DNA為模板,分別用一對(duì)擴(kuò)增SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因部分片段的引物和一對(duì)ISSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,所有DNA均能擴(kuò)增出預(yù)期的條帶;用不同的限制性內(nèi)切酶對(duì)所提取的甘蔗基因組DNA進(jìn)行酶切,所有DNA樣品均能完全酶切.本研究得出最佳甘蔗基因組DNA提取方法如下:磨碎甘蔗葉片后,加DNA提取液(SDS: 1.5%;Tris: 100 mM;EDTA: 20 mM;NaCl: 500 mM)于65℃裂解30 min,經(jīng)酚∶氯仿和氯仿各抽提一次,可獲得高產(chǎn)量高質(zhì)量的甘蔗基因組DNA,能滿足后續(xù)分子生物學(xué)研究的要求.

作 者： 黃東亮 覃肖良 廖青 高軼靜 方鋒學(xué)   作者單位： 黃東亮,高軼靜,方鋒學(xué)(廣西甘蔗研究所,南寧,530007)

覃肖良(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),北京,100083)

廖青(廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所,南寧,530007) 

刊 名： 生物技術(shù)通報(bào)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2010 ""(5)  分類號(hào)：   關(guān)鍵詞： 甘蔗   基因組DNA   提取  

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