醫(yī)學(xué)碩士研究生開題報告

時間：2023-05-06 16:23:45 開題報告我要投稿

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　　研究課題名稱

醫(yī)學(xué)碩士研究生開題報告

　　硫化氫在大鼠燒傷休克后應(yīng)激反應(yīng)中的作用

　　一、研究內(nèi) 容和意義

　　探討大鼠重度燒傷休克后氣體信號分子硫化氫(h2s)血清中的變化對燒傷休克后早期應(yīng)激反應(yīng)的影響，主要表現(xiàn)為血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化，為重度燒傷早期的休克應(yīng)激反應(yīng)引入新的理論機(jī)制，為燒傷后抗休克治療尋找新的研究方向。78只雄性sd大鼠，隨機(jī)分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、nahs組、ppg組。燒傷組大鼠制成30%三度燙傷后，在6h、12h、24h、48h、96h各時項點(diǎn)采集血清。采用敏感硫電極法測定血清h2s濃度，采用試劑盒分析儀分析血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))變化，采用16道生理指標(biāo)測量儀測定大鼠心率、血壓。單純燒傷組血清硫化氫濃度較非燒傷組明顯升高。單純燒傷組、nahs組、ppg組兩兩比較均有差異。燒傷后大鼠不同時期血清硫化氫濃度不同。不同硫化氫濃度下血管活性物質(zhì)表達(dá)不同。硫化氫可能參與并抑制燒傷休克后應(yīng)激過程，為重度燒傷后抗休克治療提出新的研究方向。

　　二、選題依據(jù)

　　闡述該選題的研究意義，分析和該研究課題有關(guān)的國內(nèi)外研究概況和發(fā)展趨勢。

　　近年來研究發(fā)現(xiàn)，生理濃度的硫化氫(hydrogensulfide，h2s)具有多種的生理功能，與氣體分子 no、co在部分生物學(xué)功能方面相同或相似，因此它被看作體內(nèi)第三種的氣體信號分子，在多個系統(tǒng)中具有重要的病理生理學(xué)意義，已成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。研究已發(fā)現(xiàn)它在高血壓、缺氧性肺動脈高壓等疾病的發(fā)病過程中具有重要的作用。然而對疾病情況下的 h2s作用的認(rèn)識則剛剛起步。本實驗通過外源性h2s干預(yù)燒傷后大鼠，觀測大鼠重度燒傷休克后早期應(yīng)激反應(yīng)中兩種血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化，從而進(jìn)一步了解硫化氫在重度燒傷休克后早期應(yīng)激過程中的作用。

　　2、國內(nèi)外主要參考文獻(xiàn)(列出作者、論文名稱、期刊名稱、出版年月)

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　　三、研究內(nèi)容、創(chuàng)新之處

　　1、選題的目的、研究內(nèi)容：

　　硫化氫作為第三種氣體信號分子應(yīng)用于各領(lǐng)域的多方面研究，并得出可觀的研究成果。氣體信號分子具有多種病理生理作用。近年來，不少研究人員紛紛開始了氣體信號分子在燒傷中，尤其重度燒傷后全身應(yīng)激反應(yīng)中作用的研究。并取得具有一定價值的研究結(jié)果。目前，氣體信號分子尤其是硫化氫在燒傷方面的研究尚且不足，有待做出更多的相關(guān)研究。以更多了解硫化氫等在燒傷休克應(yīng)激反應(yīng)中的應(yīng)用價值。

　　本實驗應(yīng)用大面積燒傷大鼠模型，通過對外源性硫化氫干預(yù)重度燒傷大鼠對血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))表達(dá)的影響和大鼠心率血壓的改變，探討其與燒傷休克后應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系，為臨床嚴(yán)重?zé)齻罂剐菘酥委煂で罂赡苡行У闹委熕幬锾峁⿲嶒炓罁?jù)，也為對硫化氫的進(jìn)一步研究提供實驗數(shù)據(jù)。

　　2、意義及創(chuàng)新之處：

　　⑴首次研究h2s是否參與了燒傷休克早期應(yīng)激的病理生理過程。

　　⑵研究燒傷休克后血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))表達(dá)的變化規(guī)律。

　　⑶為嚴(yán)重?zé)齻缙趹?yīng)激過程引入新的理論機(jī)制，為燒傷抗休克治療尋找新的研究方向。

　　3、應(yīng)用前景：

　　第三種內(nèi)源性氣體信號分子h2s 越來越受到人們的廣泛關(guān)注和重視,成為當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱門課題。h2s 具有多種生物學(xué)效應(yīng), 在全身多系統(tǒng)中參與了許多方面的生理及病理生理過程，揭示了某些疾病未知的發(fā)病機(jī)理，并提出了新的治療途徑，具有廣闊的研究前景和應(yīng)用價值。目前對h2s在心血管循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)等的研究已有很大的成果，但在大面積嚴(yán)重?zé)齻∪伺K器保護(hù)及與全身炎癥反應(yīng)綜合征方面的研究相對缺乏。本實驗旨在探討h2s對嚴(yán)重?zé)齻笤缙趹?yīng)激反應(yīng)的抗休克作用，從而為臨床重度燒傷患者的疾病演變和治療提供一條新的思路。

　　四、課題設(shè)計方案

　　包括研究工作的主要技術(shù)路線、實驗方法或資料收集方法、統(tǒng)計處理的方法等：

　　1.主要技術(shù)路線

　　2.試驗方法

　　1)動物模型制備及分組

　　78只健康雄性 sd大鼠，體重 200～240 g，購于青海省地方病疾病控制中心。在大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、nahs干預(yù)組、ppg干預(yù)組。分別設(shè)6h、12h、24h、48h組各6只，燒傷組大鼠背部脫毛并烏拉坦麻醉后，仰臥固定在燒傷模型板上，將背部裸露皮膚浸泡在95°c恒溫水箱中20秒，制成30%三度燙傷后，立即用紗布拭干水漬，腹腔注射生理鹽水40 ml/kg抗休克，自由進(jìn)食水。nahs干預(yù)組補(bǔ)液復(fù)蘇后腹腔注射硫氫化氫2ml，ppg干預(yù)組復(fù)蘇后腹腔注射ppg2ml。正常對照組大鼠予以背部剃毛及麻醉后浸入 37 cc水浴中假燙 20 s，假燙后不給復(fù)蘇補(bǔ)液。單純燒傷組背部剃毛及麻醉后浸入95 cc水浴中燙 20 s，燙后復(fù)蘇補(bǔ)液，不給任何干預(yù)。

　　2)大鼠血壓、心率的測定。

　　各組大鼠均在6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時相點(diǎn)內(nèi)分別隨機(jī)選取對應(yīng)大鼠，烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下，用16道生理測量儀，在頸部頸動脈插管下測定大鼠心率、血壓。

　　3)血標(biāo)本的采集和處理。

　　各組大鼠均于取血前 12 h禁食，于6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時相點(diǎn)內(nèi)分別隨機(jī)選取對應(yīng)大鼠，烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下，剖腹，直視下腹主動脈采血，每只大鼠抽血 2 ml，室溫下靜置約 20 min后，XX轉(zhuǎn)離心 10 分鐘，分離出血清，置于一70℃冰箱中冰凍保存，待測。

　　4)血清硫化氫及各血管活性物質(zhì)的含量測定

　　血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))的含量測定采用酶聯(lián)免疫吸附(elisa)法，硫化氫采用比色法測定，操作均按照說明書進(jìn)行。分別記錄每時相點(diǎn)檢測血清中各個因子含量，比較各組大鼠血清中硫化氫及c-反應(yīng)蛋白、il-6、總體抗氧化能力的含量變化。

　　3.統(tǒng)計學(xué)處理方法

　　采用 spss17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用例數(shù)及百分?jǐn)?shù)表示，計量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示。率的比較采用卡方檢驗;不同時相點(diǎn)下各組間均數(shù)比較采用方差分析，兩組間均數(shù)的比較采用 lsd檢驗;同一時相點(diǎn)兩組間比較采用 t 檢驗。以 p0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義標(biāo)準(zhǔn)。

　　五、實施計劃進(jìn)度

　　XX.9---XX.10 文獻(xiàn)資料的檢索、課題預(yù)調(diào)查、撰寫綜述。

　　XX.10---XX.11 藥物置備、動物購買、預(yù)實驗及撰寫開題報告。

　　XX.11---XX.1 動物實驗研究。

　　XX. 1--XX.2 實驗指標(biāo)檢測及數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計、撰寫論文。

　　XX. 2-XX. 4 完成論文，審查論文。

　　六、預(yù)期研究成果

　　預(yù)期結(jié)果及其意義：

　　通過對大鼠燒傷后給予外源性氣體信號分子硫化氫(h2s)前后血清血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓動態(tài)變化的對比，表明h2s參與了燒傷休克早期應(yīng)激的病理生理過程，并有一定的抗休克作用。為嚴(yán)重?zé)齻缙谛菘说牟±砩碜兓胄碌睦碚摍C(jī)制，為燒傷抗炎治療尋找新的研究方向。

　　七、估算課題工作量、完成課題的條件

　　1、儀器設(shè)備、人員配備、實驗動物、藥物試劑等：

　　(1)儀器設(shè)備:

　　95℃恒溫水浴箱;

　　高轉(zhuǎn)速離心機(jī);

　　16道生理指標(biāo)測量儀;

　　敏感硫電極;

　　722光柵分光光度計;

　　酶標(biāo)儀。

　　(2)人員配置：

　　符合條件的實驗室及相關(guān)技術(shù)人員的指導(dǎo)和協(xié)助。

　　(3)實驗動物

　　健康雄性sd大鼠78只，體重200～250 g，青海省地方病疾病控制中心選購。

　　(4)藥物試劑

　　硫氫化鈉(nahs)注射液;ld-炔丙基甘氨酸(ppg)注射液;烏拉坦麻醉劑;大鼠組胺(his)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;大鼠p物質(zhì)(sp)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;抗壞血酸(c6h8o6);氫氧化鈉(naoh);乙二胺四乙酸二鈉(edta);na2s9h2o;l-半胱氨酸;5-磷酸吡哆醛;磷酸二氫鉀;磷酸氫二鉀;三氯乙酸;三氯化鐵;醋酸鋅;對氨基二甲基對苯二胺鹽酸鹽

　　2、開展科學(xué)研究的經(jīng)費(fèi)

　　項目經(jīng)費(fèi)支出(元)備注(依據(jù)與說明)

　　一、研究經(jīng)費(fèi)

　　1、科研業(yè)務(wù)費(fèi)

　　(1)測試/計算/分析費(fèi)

　　(2)能源/動力費(fèi)1000

　　(3)會議/差旅費(fèi)

　　(4)出版物/文獻(xiàn)信息費(fèi)500

　　2、實驗材料費(fèi)

　　(1)原材料/試劑/分析費(fèi)2650兩個個試劑盒2200元;麻醉劑450元

　　(2)其他4160實驗大鼠、籠具及飼料

　　3、儀器設(shè)備