醫(yī)學碩士研究生開題報告

時間：2023-05-06 16:23:45 開題報告我要投稿

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醫(yī)學碩士研究生開題報告

　　研究課題名稱

醫(yī)學碩士研究生開題報告

　　硫化氫在大鼠燒傷休克后應激反應中的作用

　　一、研究內(nèi) 容和意義

　　探討大鼠重度燒傷休克后氣體信號分子硫化氫(h2s)血清中的變化對燒傷休克后早期應激反應的影響，主要表現(xiàn)為血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化，為重度燒傷早期的休克應激反應引入新的理論機制，為燒傷后抗休克治療尋找新的研究方向。78只雄性sd大鼠，隨機分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、nahs組、ppg組。燒傷組大鼠制成30%三度燙傷后，在6h、12h、24h、48h、96h各時項點采集血清。采用敏感硫電極法測定血清h2s濃度，采用試劑盒分析儀分析血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))變化，采用16道生理指標測量儀測定大鼠心率、血壓。單純燒傷組血清硫化氫濃度較非燒傷組明顯升高。單純燒傷組、nahs組、ppg組兩兩比較均有差異。燒傷后大鼠不同時期血清硫化氫濃度不同。不同硫化氫濃度下血管活性物質(zhì)表達不同。硫化氫可能參與并抑制燒傷休克后應激過程，為重度燒傷后抗休克治療提出新的研究方向。

　　二、選題依據(jù)

　　闡述該選題的研究意義，分析和該研究課題有關(guān)的國內(nèi)外研究概況和發(fā)展趨勢。

　　近年來研究發(fā)現(xiàn)，生理濃度的硫化氫(hydrogensulfide，h2s)具有多種的生理功能，與氣體分子 no、co在部分生物學功能方面相同或相似，因此它被看作體內(nèi)第三種的氣體信號分子，在多個系統(tǒng)中具有重要的病理生理學意義，已成為國內(nèi)外醫(yī)學研究的熱點。研究已發(fā)現(xiàn)它在高血壓、缺氧性肺動脈高壓等疾病的發(fā)病過程中具有重要的作用。然而對疾病情況下的 h2s作用的認識則剛剛起步。本實驗通過外源性h2s干預燒傷后大鼠，觀測大鼠重度燒傷休克后早期應激反應中兩種血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化，從而進一步了解硫化氫在重度燒傷休克后早期應激過程中的作用。

　　2、國內(nèi)外主要參考文獻(列出作者、論文名稱、期刊名稱、出版年月)

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　　三、研究內(nèi)容、創(chuàng)新之處

　　1、選題的目的、研究內(nèi)容：

　　硫化氫作為第三種氣體信號分子應用于各領(lǐng)域的多方面研究，并得出可觀的研究成果。氣體信號分子具有多種病理生理作用。近年來，不少研究人員紛紛開始了氣體信號分子在燒傷中，尤其重度燒傷后全身應激反應中作用的研究。并取得具有一定價值的研究結(jié)果。目前，氣體信號分子尤其是硫化氫在燒傷方面的研究尚且不足，有待做出更多的相關(guān)研究。以更多了解硫化氫等在燒傷休克應激反應中的應用價值。

　　本實驗應用大面積燒傷大鼠模型，通過對外源性硫化氫干預重度燒傷大鼠對血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))表達的影響和大鼠心率血壓的改變，探討其與燒傷休克后應激反應的關(guān)系，為臨床嚴重燒傷后抗休克治療尋求可能有效的治療藥物提供實驗依據(jù)，也為對硫化氫的進一步研究提供實驗數(shù)據(jù)。

　　2、意義及創(chuàng)新之處：

　�、攀状窝芯縣2s是否參與了燒傷休克早期應激的病理生理過程。

　�、蒲芯繜齻菘撕笱逯醒芑钚晕镔|(zhì)(組胺、p物質(zhì))表達的變化規(guī)律。

　�、菫閲乐責齻缙趹み^程引入新的理論機制，為燒傷抗休克治療尋找新的研究方向。

　　3、應用前景：

　　第三種內(nèi)源性氣體信號分子h2s 越來越受到人們的廣泛關(guān)注和重視,成為當前生物醫(yī)學領(lǐng)域研究的熱門課題。h2s 具有多種生物學效應, 在全身多系統(tǒng)中參與了許多方面的生理及病理生理過程，揭示了某些疾病未知的發(fā)病機理，并提出了新的治療途徑，具有廣闊的研究前景和應用價值。目前對h2s在心血管循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)等的研究已有很大的成果，但在大面積嚴重燒傷病人臟器保護及與全身炎癥反應綜合征方面的研究相對缺乏。本實驗旨在探討h2s對嚴重燒傷后早期應激反應的抗休克作用，從而為臨床重度燒傷患者的疾病演變和治療提供一條新的思路。

　　四、課題設計方案

　　包括研究工作的主要技術(shù)路線、實驗方法或資料收集方法、統(tǒng)計處理的方法等：

　　1.主要技術(shù)路線

　　2.試驗方法

　　1)動物模型制備及分組

　　78只健康雄性 sd大鼠，體重 200～240 g，購于青海省地方病疾病控制中心。在大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、nahs干預組、ppg干預組。分別設6h、12h、24h、48h組各6只，燒傷組大鼠背部脫毛并烏拉坦麻醉后，仰臥固定在燒傷模型板上，將背部裸露皮膚浸泡在95°c恒溫水箱中20秒，制成30%三度燙傷后，立即用紗布拭干水漬，腹腔注射生理鹽水40 ml/kg抗休克，自由進食水。nahs干預組補液復蘇后腹腔注射硫氫化氫2ml，ppg干預組復蘇后腹腔注射ppg2ml。正常對照組大鼠予以背部剃毛及麻醉后浸入 37 cc水浴中假燙 20 s，假燙后不給復蘇補液。單純燒傷組背部剃毛及麻醉后浸入95 cc水浴中燙 20 s，燙后復蘇補液，不給任何干預。

　　2)大鼠血壓、心率的測定。

　　各組大鼠均在6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時相點內(nèi)分別隨機選取對應大鼠，烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下，用16道生理測量儀，在頸部頸動脈插管下測定大鼠心率、血壓。

　　3)血標本的采集和處理。

　　各組大鼠均于取血前 12 h禁食，于6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時相點內(nèi)分別隨機選取對應大鼠，烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下，剖腹，直視下腹主動脈采血，每只大鼠抽血 2 ml，室溫下靜置約 20 min后，XX轉(zhuǎn)離心 10 分鐘，分離出血清，置于一70℃冰箱中冰凍保存，待測。

　　4)血清硫化氫及各血管活性物質(zhì)的含量測定

　　血清中血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))的含量測定采用酶聯(lián)免疫吸附(elisa)法，硫化氫采用比色法測定，操作均按照說明書進行。分別記錄每時相點檢測血清中各個因子含量，比較各組大鼠血清中硫化氫及c-反應蛋白、il-6、總體抗氧化能力的含量變化。

　　3.統(tǒng)計學處理方法

　　采用 spss17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用例數(shù)及百分數(shù)表示，計量資料以均數(shù) ±標準差( ±s)表示。率的比較采用卡方檢驗;不同時相點下各組間均數(shù)比較采用方差分析，兩組間均數(shù)的比較采用 lsd檢驗;同一時相點兩組間比較采用 t 檢驗。以 p0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義標準。

　　五、實施計劃進度

　　XX.9---XX.10 文獻資料的檢索、課題預調(diào)查、撰寫綜述。

　　XX.10---XX.11 藥物置備、動物購買、預實驗及撰寫開題報告。

　　XX.11---XX.1 動物實驗研究。

　　XX. 1--XX.2 實驗指標檢測及數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計、撰寫論文。

　　XX. 2-XX. 4 完成論文，審查論文。

　　六、預期研究成果

　　預期結(jié)果及其意義：

　　通過對大鼠燒傷后給予外源性氣體信號分子硫化氫(h2s)前后血清血管活性物質(zhì)(組胺、p物質(zhì))和大鼠心率、血壓動態(tài)變化的對比，表明h2s參與了燒傷休克早期應激的病理生理過程，并有一定的抗休克作用。為嚴重燒傷早期休克的病理生理變化引入新的理論機制，為燒傷抗炎治療尋找新的研究方向。

　　七、估算課題工作量、完成課題的條件

　　1、儀器設備、人員配備、實驗動物、藥物試劑等：

　　(1)儀器設備:

　　95℃恒溫水浴箱;

　　高轉(zhuǎn)速離心機;

　　16道生理指標測量儀;

　　敏感硫電極;

　　722光柵分光光度計;

　　酶標儀。

　　(2)人員配置：

　　符合條件的實驗室及相關(guān)技術(shù)人員的指導和協(xié)助。

　　(3)實驗動物

　　健康雄性sd大鼠78只，體重200～250 g，青海省地方病疾病控制中心選購。

　　(4)藥物試劑

　　硫氫化鈉(nahs)注射液;ld-炔丙基甘氨酸(ppg)注射液;烏拉坦麻醉劑;大鼠組胺(his)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;大鼠p物質(zhì)(sp)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;抗壞血酸(c6h8o6);氫氧化鈉(naoh);乙二胺四乙酸二鈉(edta);na2s9h2o;l-半胱氨酸;5-磷酸吡哆醛;磷酸二氫鉀;磷酸氫二鉀;三氯乙酸;三氯化鐵;醋酸鋅;對氨基二甲基對苯二胺鹽酸鹽

　　2、開展科學研究的經(jīng)費

　　項目經(jīng)費支出(元)備注(依據(jù)與說明)

　　一、研究經(jīng)費

　　1、科研業(yè)務費

　　(1)測試/計算/分析費

　　(2)能源/動力費1000

　　(3)會議/差旅費

　　(4)出版物/文獻信息費500

　　2、實驗材料費

　　(1)原材料/試劑/分析費2650兩個個試劑盒2200元;麻醉劑450元

　　(2)其他4160實驗大鼠、籠具及飼料

　　3、儀器設備